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诺如病毒GⅡ.4型流行株基因序列分析和流行病学研究
目的 研究诺如病毒的基因特征和变化规律,预测诺如病毒的进化方向及流行趋势,为预防诺如病毒病的暴发打下良好基础. 方法 采用RNA提取试剂Trizol提取诺如病毒毒株RNA,采用试剂盒TaKaRa Ex TAP进行PCR扩增,利用Bioedit软件对基因序列进行拼接,然后对基因序列分析.将PCR扩增出的P区域克隆到表达载体,构建原核表达质粒.在大肠埃希菌中表达P蛋白,重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测.以ABO血型健康人唾液为受体研究P粒子与唾液HBGA结合能力,检测方法采用间接ELISA法. 结果 实验用诺如病毒毒株与GⅡ.4流行株在RdRp区的核苷酸序列同源性达到94％以上,其中US95/96株94％,Farmington Hills株94.2％,Hunter株94.7％,Den_Haag_2006b株95.8％,Osaka_2007株96.5％,New_Orleans_2009株97.2％,Sydney_2012株98.4％.实验株与GⅡ.4流行株在衣壳蛋白区的核苷酸序列同源性达到94％以上,其中US95/96株94.3％,Farmington Hills株94.1％,Hunter株95.2％,Den_Haag_2006b株96.3％,Osaka_2007株96.8％,New_Orleans_2009株97.8％,Sydney_2012株98.6％;氨基酸同源性达到96％以上,其中US95/96株为96.1％,Farmington Hills株96.3％,Hunter株97.1％,Den_Haag_2006b株96.8％,Osaka_2007株97.3％,New_Orleans_2009株97.8％,Sydney_2012株98.9％.实验株在RdRp区核糖核苷酸序列的与New_orleans2009和Sydney_2012同源性较高,实验株中P2区氨基酸位点发生多点位定向突变,如P2区第95位由天冬酰胺(N)突变为组氨酸(H).重组蛋白经SDS-PAGE凝胶分离检测产物大小为35 ku的目的蛋白表达.检测P粒子与唾液HBGA结合能力(A450值)血型A为3.81～5.12;血型B为3.12～4.05;血型O为2.85～3.51. 结论 诺如病毒在遗传上具有多样性,变异快的特点,因而很难有疫苗对它长期安全有效.通过对GⅡ.4型基因序列的研究,有助于寻找其关键位点变化规律和流行株进化机理,有助于预测诺如病毒的进化方向及流行趋势.
关键词： 诺如病毒GⅡ.4型流行株 基因序列分析 流行趋势
