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fbpA基因文献资料
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卡介苗分泌型Ag85A基因fbpA转化番茄的检测与鉴定
目的 了解卡介苗分泌型Ag85A基因fbpA在番茄中转化的情况. 方法 采用叶片煮沸快速PCR法检测fbpA基因;以番茄总DNA为模板,PCR法扩增目的基因fbpA;采用Southern blot检测目的基因fbpA在番茄染色体DNA中的整合情况,Western blot检测分泌型Ag85A在番茄果实中的表达情况. 结果 叶片煮沸快速PCR检出21株fbpA阳性转化不定芽,以番茄总DNA为模板的PCR法扩增出其中9株转化植株带有目的基因fbpA.Southern blot证实这9株番茄染色体DNA中整合了外源目的基因fbpA,Western blot检测到其中5株番茄果实中表达的卡介苗分泌型Ag85A与结核病人血清发生特异性免疫反应. 结论 番茄染色体DNA中整合了外源目的基因fbpA,果实中有该基因产物分泌型Ag85A表达.
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单菌落PCR快速鉴定卡介苗fbpA基因
目的分离、鉴定卡介苗fbpA基因,探求新型结核病疫苗的候选保护性抗原.方法用PCR法从卡介苗基因组DNA中分离fbpA基因,克隆在pUCm-T载体上,用单菌落PCR扩增快速鉴定DNA片段后再用HindⅢ酶切进一步鉴定.结果单菌落PCR和Hind Ⅲ酶切鉴定证实fbpA基因与预期大小一致.结论用单菌落PCR扩增快速鉴定克隆在pUCm-T载体上的fbpA基因是一种简便、经济的方法.fbpA基因的分离为进一步分析其功能与探索新型结核病疫苗奠定了基础.
