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慢病毒介导的Isl1基因在人骨髓间充质干细胞中的表达
研究慢病毒介导的Isl1基因在人骨髓间充质干细胞(hMSC)中的表达情况,并检测其下游基因Nkx2.5和Flk-1的表达。方法 多位点Gateway载体构建技术构建2K7puro/EF 1α-Isl1慢病毒表达载体(由EF1α启动子启动Isl1基因表达)。包装细胞293FT细胞获得慢病毒,再转染至hMSC。利用嘌呤霉素抗性筛选出Isll阳性细胞。应用RT-PCR、Western blotting检测hMSC中Isl1基因在转染后1～6周的mRNA和1～4周的蛋白表达情况。结果 成功构建了慢病毒载体EF1α-Isl1,转染后hMSC中检测出Isl1基因mRNA和蛋白的表达,其mRNA表达随着培养时间延长而上调,第3周表达量(0.65±0.14)较1、2周增多(0.36±0.09,0.37±0.05,均P＜0.05),3周后表达趋于稳定。转染后在无任何诱导剂的情况下,检测到Isl1下游基因Nkx2.5的表达,但尚未见Flk-1的表达。结论通过慢病毒载体将Isl1基因转染hMSC后,可获得长期稳定的表达,并在无任何诱导剂的情况下,能促进下游基因Nkx2.5的表达。
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室间隔缺损患者ISL1基因突变的研究
目的 在中国室间隔缺损患者中寻找ISL1基因致病突变,探讨其与室间隔缺损发生之间的关系.方法 采用PCR直接测序技术对195例室间隔缺损患者ISL1基因的主要编码区以及外显子-内含子交界区进行基因突变分析.结果 在患者中发现3个已知的单核苷酸多态性位点rs2288468、rs2303750和rs2303751,没有发现新的基因突变.3个单核苷酸多态性位点的基因型频率和等位基因频率在室间隔缺损患者和对照组之间无统计学差异.结论 ISL1基因突变在室间隔缺损的发病机制中可能不占主导地位.
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胰岛因子1基因2个SNP位点与儿童先天性心脏病的相关性研究
目的 探讨天津地区汉族儿童胰岛因子1(Islet1,ISL1)基因2个单核苷酸多态性(SNP)位点rs41268421、rs1017与先天性心脏病(CHD)的相关性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和基因测序技术对35例CHD患儿和30名除外CHD儿童的rs41268421、rs1017位点进行检测,分别比较两个SNP位点基因型频率和等位基因频率在两组的分布情况,并进行单体型分析.结果 SNP位点rs41268421存在GG、GT、TT3种基因型,CHD组T等位基因频率及携带T等位基因的基因型(包括GT和TT)频率高于对照组(P＜0.05),携带T等位基因的儿童患CHD的危险是G等位基因的4.833倍；rs1017位点存在AA、AT、TT3种基因型,CHD组T等位基因频率及携带T等位基因的基因型(包括AT和TT)频率高于对照组(P＜0.05),携带T等位基因的儿童患CHD的危险是A等位基因的4.491倍；2个SNPs位点得出4种单体型,以TF型儿童发生CHD的危险性高(OR=7.813).结论 天津地区汉族儿童中ISL1基因单体型TT的出现很可能会增加CHD的患病风险.
