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巴西利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析
体外培养巴西利什曼原虫(Lb,Leishmania braziliensis)株无鞭毛体,常规方法提取制备基因组DNA.以公开发表的婴儿利什曼原虫(Li,Leishmania in fantum)的激活蛋白激酶C受体RACK(receptor for activated protein C kinase)基因核苷酸序列为参照,设计并合成利什曼原虫RACK基因序列特异性的引物.以巴西利什曼原虫的基因组DNA为模板,利用多聚酶链反应(PCR)技术,扩增获得巴西利什曼原虫RACK的全长编码基因.基因序列测定结果表明,巴西利什曼原虫RACK基因序列长度为1 025 bp,开放读码框架由939 bp组成,编码产物为312个氨基酸残基.获得的巴西利什曼原虫的RACK基因与报导的婴儿利什曼原虫的RACK基因编码产物的序列同源性达99%(310/312).本研究克隆了巴西利什曼原虫的RACK基因,为应用诱导T细胞免疫应答抗原的编码基因进行巴西利什曼原虫的基因疫苗研究奠定了基础.
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杜氏利什曼原虫激活蛋白激酶C受体的基因克隆化与序列分析
目的克隆杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani Ld)1S株激活蛋白激酶C受体(RACK,receptor of activated protein C kinase)的编码基因,为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗的研究奠定基础.方法体外培养杜氏利什曼原虫1S株无鞭毛体,常规方法提取制备基因组DNA.以硕大利什曼原虫(Leishmania amjor)的RACK基因的核苷酸序列为参照,设计并合成利什曼原虫RACK基因序列特异性的引物.以杜氏利什曼原虫的基因组DNA为模板,利用多聚酶链反应(PCR)技术,扩增获得了杜氏利什曼原虫RACK的全长编码基因.结果基因序列测定结果表明,杜氏利什曼原虫1S株RACK基因序列长度为981bp,开放读码框架由831bp组成,编码产物为276个氨基酸残基.获得的杜氏利什曼原虫1S株的RACK基因与来源于硕大利什曼原虫的RACK基因序列同源性达98%(264/267).结论本研究克隆了杜氏利什曼原虫的RACK基因,为应用诱导T细胞免疫应答抗原的编码基因进行杜氏利什曼原虫的基因疫苗研究奠定了基础.
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杜氏利什曼原虫蛋白磷酸酶-2C的基因克隆化
目的克隆杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani,Ld)1S株蛋白磷酸酶2C(PP2C)的编码基因，为应用这种编码T细胞抗原的基因进行基因疫苗研究奠定基础。方法体外培养杜氏利什曼原虫1S株无鞭毛体，常规方法从虫体提取制备基因组DNA。以夏科氏利什曼原虫(Leishmania chagasi,Lc)的PP2C基因序列为参照，设计并合成利什曼原虫PP2C基因序列特异性的引物。结果以杜氏利什曼原虫的基因组为模板，利用多聚酶链反应(PCR)技术，扩增获得了杜氏利什曼原虫PP2C的全长编码基因。基因序列测定结果表明，杜氏利什曼原虫1S株PP2C基因序列长度为1 317bp，开放读码框架由1 221bp组成，编码产物为406个氨基酸残基。获得的杜氏利什曼原虫1S株的PP2C基因与来源于夏科氏利什曼原虫的PP2C氨基酸残基序列的同源性为95%(387/406)。结论本研究克隆了杜氏利什曼原虫的PP2C基因，为应用诱导T细胞免疫应答抗原的编码基因进行杜氏利什曼原虫的基因疫苗研究奠定了基础。
