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Pin1抑制剂对小鼠植入前胚体外发育的影响
目的 观察Pin1在小鼠植入前胚中的定位分布及其抑制剂胡桃醌(Juglone)对小鼠植入前胚体外发育的影响.方法 免疫荧光染色观察不同发育阶段植入前胚中Pin1的分布;收集小鼠1-细胞胚,以KSOM培养液为对照组,以培养液中添加有不同浓度的Juglone为实验组,观察各组1-细胞胚体外发育情况;Real-time PCR检测体外发育2-细胞胚内干细胞转录因子(Sox2、Oct4 、c-Myc和Klf4)mRNA表达水平.结果 小鼠不同发育阶段植入前胚中都存在Pin1的表达,胞质和胞核内均有分布,且核内荧光着色明显比胞质强;10 μmol/L和25 μmol/L胡桃醌持续作用93h(注射人绒毛膜促性腺激素后27h ～ 120h)使1-细胞胚阻滞于2-细胞阶段,极少能过渡至4-细胞胚(P＜0.01).25μmol/L胡桃醌短时间作用18h(注射人绒毛膜促性腺激素后27～ 45h)同样使1-细胞胚发育阻滞于2-细胞胚(P ＜0.01);25μmol/L胡桃醌组2-细胞胚内Sox2 mRNA表达水平低于KSOM组(P＜0.05),而Klf4、c-Myc和Oct4 mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 小鼠1-细胞胚之后,Pin1主要定位在细胞核内,提示其可能参与细胞转录活动.且Pin1抑制剂(胡桃醌)能使2-细胞胚至4-细胞胚过渡率明显降低,并使干细胞转录因子Sox2 mRNA表达下调,提示Pin1在小鼠植入前胚早期发育阶段具有一定作用,其参与调控合子基因组激活与干细胞转录因子Sox2有关.
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影响体外鼠胚试验标准化的要素分析
不孕症已成为影响人类生殖健康的全球性问题,作为治疗不孕症的一种重要治疗手段,辅助生殖技术经过几十年的发展已经获得长足进步.辅助生殖技术用医疗器械产业快速发展,对此类产品进行风险管理,制定相应的安全性评价检测方法已势在必行.2016年行业标准YY/T 1434-2016《人类体外辅助生殖技术用医疗器械体外鼠胚试验》已经发布,本文就体外鼠胚试验中的关键节点和试验体系要素进行简要综述.
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阻滞和非阻滞品系小鼠体外发育2-细胞胚基因表达水平的比较
目的:检测阻滞品系昆明小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠体外发育2-细胞胚内基因表达水平的差异,探讨昆明小鼠植入前胚体外发育阻滞与哪些基因表达调控有关.方法:分别收集昆明小鼠和B6C3F1小鼠体外培养2-细胞胚,运用基因芯片分析和Real-time PCR验证.结果:基因芯片检测共筛出差异表达基因303个,其中昆明小鼠2-细胞胚表达上调基因有168个；下调基因有135个.昆明小鼠2细胞胚表达上调的基因以信号转导、细胞周期、细胞结构和运动、细胞增殖和分化以及发育进程等为主；而下调基因与电子转移、蛋白质代谢和修饰、氨基酸代谢以及蛋白质靶向运输和定位等相关.结论:胚内能量供应不足和蛋白质合成障碍可能是昆明小鼠植入前胚体外发育出现2-细胞阻滞的重要原因.
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小鼠早期胚胎的体外培养研究
目的寻求一种体外稳定培养早期胚胎的方法.方法比较了不同培养基(M1 6、G1、CZB)从受精卵到囊胚的培养效果,并对CZB做了加糖与不加糖、加BSA与15%FBS的比较研究.对体外形成的囊胚做细胞记数以评估胚胎的质量.结果CZB无论加糖还是不加糖,均能有效克服2-细胞阻滞(70.0%～84.6%),加糖CZB囊胚形成率(46.1%～50.0%)更高.受精卵一直在无糖CZB中培养与第3 d后转入加糖CZB培养的桑椹胚和囊胚形成率无显著性差异.CZB中加BSA和15%FBS的培养效果相当.体外培养形成的囊胚较体内发育有迟滞现象,但是细胞记数无显著性差异.结论对于昆明小鼠早期胚胎的体外培养,CZB是较M16、G1更适合的培养基,且CZB中从一开始就应该加糖.CZB中加BSA足可取代FBS,其培养的胚胎无明显异常.
