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副粘病毒HN蛋白颈部与F相互作用区功能的研究
副粘病毒 (Paramyxovirus) 包膜上镶嵌着两种糖蛋白血凝素-神经氨酸酶 (Hemagglutinin-neuraminidase, HN) 和融合蛋白 (Fusion protein, F), 两者的相互作用是决定病毒宿主范围、毒力和传播的关键.为探讨HN颈部与F相互作用区 (Fusion interaction region, FIR) 在膜融合机制中的作用, 选取新城疫病毒 (Newcastle disease virus, NDV) 与人副流感病毒3型 (human parainfluenza virus type 3, hPIV3) 为研究对象, 通过片段置换及同源重组技术构建嵌合体C1、C2, 进一步将NDV及hPIV3HN的FIR内第51位丝氨酸 (Serine, S) 、第55位天冬氨酸 (Aspartic acid, D) 定点突变为丙氨酸 (Alanine, A), 获得突变体NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A, 对嵌合体及突变体蛋白的细胞表面表达效率、受体识别活性、神经氨酸酶活性、促细胞融合活性及半融合活性进行检测.结果:各嵌合体C1、C2及突变体NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A的细胞表达效率、神经氨酸酶活性 (Neuraminidase, NA) 与野生型相比差异不显著 (P>0.05), 但促细胞融合活性均有不同程度的降低 (P<0.05), C1、C2、NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A分别为野生型的7％、9％、27％、19％、17％和21％;C1、C2、NDV S51A、NDV D55A、hPIV3S51A、hPIV3D55A的受体识别活性分别为14.7％、22.3％、35.5％、28.8％、33.9％和40.2％, 与野生型相比差异显著 (P<0.05) .结果表明:副粘病毒HN蛋白颈部与F相互作用区的突变及置换使HN蛋白的促细胞融合活性、受体识别活性降低, 其中第51位丝氨酸 (S51) 及第55位天冬氨酸 (D55) 发挥重要作用.
