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流感病毒A/PR/8/34重配母本株高免疫原性HA蛋白制备及鉴定
制备流感病毒经典重配过程中所需的A/PR/8/34母本株血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)抗血清.A/PR/8/34流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化.5％～20％蔗糖连续密度梯度离心法纯化HA蛋白.单向免疫扩散法(Single Radial Immunodiffusion,SRID)筛选目的蛋白.SDS-PAGE法鉴定目的蛋白.纯化的A/PR/8/34 HA蛋白免疫兔子制备抗血清,血凝抑制试验(Hemoglutination Inhibition Assay,HI)测定HA抗血清效价,经SRID法鉴定HA抗血清纯度.成功制备了高免疫原性A/PR/8/34 HA蛋白;兔抗血清HI滴度可达10240,SRID法鉴定为高纯度HA抗血清.制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础.
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流感病毒经典重配中X-157母本株HA抗血清制备
目的 制备流感病毒经典重配过程中所需的X-157母本株血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)抗血清.方法 X-157株流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化HA蛋白,蔗糖连续密度梯度离心法纯化,SDS-PAGE法鉴定纯化HA蛋白,免疫兔子收集抗血清,血凝抑制试验法(Hemoglutination Inhibition assay,HI)测定抗血清效价,单向免疫扩散法(Single Radial Immunodiffusion,SIRD)鉴定HA抗血清纯度.结果 成功制备了高免疫原性X-157株HA蛋白,兔抗HA血清HI滴度可达2560,SIRD鉴定为高纯度HA抗血清.结论 制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础.
