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抗AAV2单克隆抗体的制备及特性研究
以纯化的重组AAV2病毒颗粒为抗原免疫小鼠,获得7株稳定分泌抗AAV2衣壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中B10和G4两株单克隆抗体具有中和活性,抗体亚型分别为IgG1和IgG2a型,对这两株单克隆抗体与rAAV病毒结合的特性进行了研究.单克隆抗体B10和G4对rAAV2病毒颗粒的结合均具有良好的血清型特异性,并且这种特异结合作用不被肝素阻断.这两株抗体都不阻断AAV2病毒与敏感细胞的结合,提示它们与病毒颗粒的结合位点都不处于AAV2病毒与主要受体结合的部位内.Western blotting检测结果显示,B10与AAV2的三种衣壳蛋白VP1、VP2和VP3均能结合,而G4不能与AAV2的这三种衣壳蛋白结合.这说明B10与AAV2结合的位点位于衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的重叠部分处并且可能是线性表位,而G4则可能是针对AAV2病毒颗粒构象表位的抗体.这两种结合特性不同的单克隆抗体为研究AAV2病毒颗粒的表面特性和感染特性提供有用的工具.
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基于识别烟碱型乙酰胆碱受体α7的分子印迹聚合物脑靶向载体初步研究
本文通过构象表位策略制备一种新型脑靶向载体系统并对其进行初步评价.以丙烯酰胺和N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为载体材料,烟碱型乙酰胆碱受体α7的N端表位多肽为模板分子,经聚合反应及模板洗脱制备分子印迹纳米粒.通过粒度仪和透射电镜对制得的聚合物纳米粒进行表征,并通过靶细胞摄取和体内荧光活体成像实验考察其靶向性.结果表明,所得聚合物纳米粒粒径较小(42.1±4.3 nm),分布均一,能有效识别表位多肽且具有良好的体内外靶向性.本研究基于分子印迹原理设计并制备具有脑靶向性的印迹聚合物纳米载体,有望为药物脑部递送及相关疾病治疗提供新思路.
关键词: 烟碱型乙酰胆碱受体α7 分子印迹 构象表位 纳米粒 脑靶向