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拼接信号文献资料
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马传染性贫血病毒基因组部分转录图谱
以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物,分别在体外和体内条件下,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析.通过与病毒基因组的序列进行比较,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置.发现两种病毒在外显子-3的上游拼接受体位点(SA2)的位置与已报道的EIAV毒株均不相同,且二者的拼接信号不一致.
关键词： 马传染性贫血病毒(EIAV) 转录图谱 拼接位点 拼接信号 -
拼接信号序列单碱基变异提高马传染性贫血病毒mRNA拼接效率
分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-A EIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA为模板,利用RT-PC R的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列 .然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2 env阅读框架中,构成 CAT拼接报告系统.同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3 上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列T AG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒.用构建的3个重组表达质粒D NA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度.结果表明:EI AV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒低.由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAV mRNA外显子-2、 3之间的拼接效率.实验数据表明,EIAV SA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-A EIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相应位点拼接效率高.
