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甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs检测体系的建立
目的:建立可用于甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs测定的稳定可靠的检测体系.方法:利用Real timePCR方法对甘草HMGR,SQS1,β-AS合酶基因CNVs进行测定.结果:在HMGR,SQS1,β-AS合酶基因以及内标基因lectin的定量检测实验中,其定量反应的Ct值分别在25.82～25.88,29.01 ～29.08,15.52 ～15.56,19.06～ 19.08变化,SD分别是0.033,0.032,0.024,0.011,其CV分别是0.12％,0.22％,0.16％,0.06％.结论:所建立的Real time PCR体系重复性好,检测系统工作稳定可靠,可用于甘草HMGR,SQS1,β-AS基因的CNVs筛选.
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基于HMGR、SQS1、β-AS基因CNVs的甘草道地性机制研究
本文利用real-time PCR方法对不同产地甘草的3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(3-hydroxy-3methylglutaryl-CoA reductase,HMGR)、鲨稀合成酶1(squalene synthetase 1,SQS1)、β-香树脂醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)基因的拷贝数进行了研究,发现不同产地的HMGR基因存在1～3个拷贝数变异,SQS1基因存在1～2个拷贝数变异,未发现β-AS基因拷贝数变异.甘草HMGR、SQS1、β-AS基因拷贝数存在5种自然组合类型:A型(2+1+1)、B型(1+1+1)、C型(3+2+1)、D型(2+2+1)和E型(3+1+1),其中内蒙古杭锦旗甘草存在A、B两种类型,A与B的比例为1∶1.3；内蒙古赤峰甘草也存在A、B两种类型,但A与B比例为3∶1；宁夏盐池甘草存在A、B、C、D4种类型,A/B/C/D比例为1∶5.1∶1∶2,A/B比例为1∶5.1；甘肃民勤甘草存在A、B、E3种类型,A/B/E比例为4.1∶2.1∶1,A/B比例为2∶1.本研究证明中药功能基因基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)与产地具有相关性,可能是道地药材形成的机制之一.
