凝胶渗透色谱-多角度激光散射联用技术研究红芪多糖中4个组分分子特征

目的:测定红芪多糖3(HPS-3)中4个组分的绝对分子量,相对分子质量分布,均方根旋转半径(Rg),多分散系数(Mw/Mn)等分子特征参数,以均方根旋转半径(Rg)对重均分子量(Mw)作图,计算4个组分在溶液状态的构象.方法:采用凝胶渗透色潜-多角度激光散射(GPC-MALLS)联用技术,流动相为含0.02％ NaN3的0.1 mol·L-1NaNO3溶液,UltrahydrogelTM 1000,500色谱柱串联.结果:HPS-3的4个组分中,HPS-3-C的Mw大(1.986 × 105 g·mo1-1)；其次为HPS-3-B(1.113× 105g·mol-1)和HPS-3 -D(8.457×104g·mol-1)；HPS-3-A的Mw小(1.223×104 g·mol-1),而Rg大(55.5 nm).HPS-3-D相对分子质量分布范围广,Mw/Mn 2.543.在流动相中,HPS-3-A为球型构象,HPS-3-C为无规则线团构象,HPS-3-B和HPS-3-D则均为高枝化度结构.结论:为进一步研究HPS-3中4个组分分子特征与其生物活性的关系提供必要依据.

多角度激光散射测定重组人核苷二磷酸激酶A在溶液中的聚集状态

SEC-MALLS法测定普鲁兰糖相对分子质量及分子质量分布

目的:建立分子排阻色谱-多角度激光散射(size exclusion chromatography-multiangle laser light scattering,SEC-MALLS)系统测定普鲁兰糖的相对分子质量及分子质量分布的方法.方法:采用2根Shodex SB-806HQ色谱柱(300 mm×7.8 mm,10μm)串联,以水为流动相,流速0.5 mL· min-1,柱温35℃,检测器为多角度激光散射器(MALLS)和示差折光检测器(refractiveintexdetector,RID)联用,对普鲁兰糖的相对分子质量及分子质量分布进行测定,并对均方根旋转半径(rg)与样品在溶液中的聚集态进行分析;同时还以传统凝胶渗透色谱(GPC)法对普鲁兰糖的相对分子质量及分子质量分布进行测定,并对2种方法测定的结果进行分析比较.结果:SEC-MALLS法测定普鲁兰糖样品的结果与GPC法测定的结果比较,2种系统测定的重均相对分子质量及分子质量分布结果基本一致,同时测得普鲁兰糖在水溶液中为无规线团构象的线性聚合物.结论:SEC-MALLS法测定相对分子质量无需分子量标样,可以同时获得样品在溶液中的聚集态和构象信息,可用于普鲁兰糖的质量控制.

糖谱法结合多元色谱分析比较铁皮石斛功能性多糖结构特征

目的:比较不同产地铁皮石斛功能性多糖结构特征,为其质量控制奠定基础.方法:高效凝胶色谱联用多角度激光散射和示差折光仪法(HPSEC-MALLS-RID法)用于测定多糖的重均相对分子质量、回旋半径及含量,色谱柱为TSK-GEL G5000 PWxL串联TSK Gel G3000PWxL,柱温35℃,流动相为9 mg·mL-1氯化钠水溶液,流速0.5 mL·min-1.气相色谱联用质谱法用于分析单糖组成及糖苷键,毛细管色谱柱为Agilent HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm),进样量2μL,用于单糖组成分析的程序升温条件为起始温度165℃,保持7 min,以5℃·min-1升温至185℃,保持5 min,以4℃·min-1升温至200℃,以20℃·min-1升至280℃;用于糖苷键分析的程序升温条件为起始温度120℃,以5℃·min-1升温至200℃,以8℃·min-1升温至250℃,以20℃·min-1升至280℃.基于荧光辅助凝胶电泳、高效薄层色谱-糖谱法分析功能性多糖部分酸水解和酶解产物特征,荧光辅助凝胶电泳采用200 V分离10 min,再调整电压至700 V分离40 min,凝胶在UV 365 nm下成像;TLC展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸(7∶5∶2∶1),显色剂为苯胺-二苯胺.结果:不同产地铁皮石斛多糖重均相对分子质量、回旋半径和含量分别为0.533×105～4.575×105、19.8～71.7 nm和6.28％～28.72％;铁皮石斛功能性多糖的单糖组成主要为(乙酰)甘露糖和葡萄糖,摩尔比(3.86～6.99)∶1.00,糖苷键类型主要为1,4-Manp和1,4-Glcp,摩尔比(4.51～7.89)∶1.00;不同铁皮石斛多糖的部分酸水解和酶解产物糖谱特征相似.结论:不同产地铁皮石斛功能性多糖结构具有较高的一致性,功能性多糖是铁皮石斛较好的质量控制指标.