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小檗碱调控IR-HepG2细胞miR-29a-3p及胰岛素受体信号通路的作用机制研究
目的:探讨小檗碱(BBR)对胰岛素抵抗的HepG2细胞(IR-HepG2)中miR-29a-3p和胰岛素受体信号通路的调控机制.方法:建立胰岛素(100nm)诱导的IR-HepG2模型.生物信息学算法预测miR-29a-3p靶基因.通过RT-PCR检测miR-29a-3p和靶基因的mRNA表达.构建荧光素酶报告质粒,分析荧光素酶活性.将miR-29a-3p模拟物和抑制剂通过lipofectamine2000转染进IR-HepG2细胞.免疫印迹法检测胰岛素受体信号通路的各基因蛋白表达.结果:生物信息学提示IRS1是miR-29a-3p的靶基因.与对照组比较,模型组miR-29a-3p表达显著升高(P＜0.05),IRS1 mRNA表达水平显著降低(P＜0.01);BBR组抑制了这种变化(P＜0.05,P＜0.01).与阴性对照(NC)组比较,miR-29a-3p模拟物可显著抑制与IRS1 3'-UTR融合的荧光素酶报告基因的活性(P＜0.01).WB结果显示,miR-29a-3p下调IRS1蛋白表达,而miR-29a-3p则促进IRS1蛋白的表达.miR-29a-3p模拟物转染组IRS1mRNA表达下调,miR-29a-3p抑制剂转染组表达相反.BBR能够上调转染miR-29a-3p模拟物或抑制剂的IR-HepG2细胞中的IRS1 mRNA表达.在IR-HepG2细胞模型中,转染miR-29a-3p模拟物组的IRS1,pIRS1ser307、Akt、pAktser473和PDK1的蛋白表达均显著降低(P＜0.01),转染miR-29a-3p抑制剂后这些蛋白表达显著增加(P＜0.01).BBR治疗后,上述蛋白表达均显著增加.结论:miR-29a-3p在IR-HepG2细胞中能调控胰岛素受体信号传导通路,BBR能下调或维持miR-29a-3p水平,增加IRS1 mRNA和蛋白表达,调节胰岛素受体信号通路蛋白的表达.
关键词： 小檗碱 miRNA miR-29a-3p IRS1 胰岛素受体信号通路 -
内质网应激在高血糖致微血管损伤过程中的作用
目的 探讨内质网应激在高血糖SD大鼠微血管损伤过程中的作用.方法 健康雄性SD大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立高血糖动物模型.造模成功后1个月以无创尾动脉血压测定法检测血压,期间监测大鼠体质量和随机血糖.RT-PCR测定大鼠肠系膜阻力血管中内质网应激相关因子的基因转录水平;Western blotting测定GRP78/Bip、eNOS、Akt及IRS1的蛋白质表达水平.结果 高血糖组随机血糖较对照组显著升高,收缩压、舒张压和平均动脉压也都显著高于对照组.RT-PCR结果显示,高血糖组大鼠微血管组织内质网应激主要标志物的mRNA水平均显著升高(P＜0.05).Western blotting结果显示,高血糖组Bip的蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),IRS1、Akt及eNOS的磷酸化水平均显著下降(P＜0.05).结论 持续性高血糖能诱发实验大鼠血压升高,该作用可能与内质网应激介导的微血管功能损伤、血管组织胰岛素信号通路受损,以及eNOS的活性降低有关.
