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实时荧光定量-反转录聚合酶链文献资料
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丙型流感病毒RNA标准品的制备和实时荧光定量-反转录聚合酶链反应检测方法的建立
目的 通过分析GenBank中丙型流行性感冒(流感)病毒的序列,建立丙型流感病毒实时荧光定量-反转录聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法,并制备丙型流感病毒的RNA标准品.方法 下载GenBank中丙型流感病毒的序列,使用Beacon Designer 8软件在保守区域设计特异性引物和TaqMan荧光探针.人工合成病毒HE、NP、MP和NS基因序列,克隆到pBluescriptⅡ SK(+)质粒载体,进一步通过体外转录获得RNA模板,并验证检测方法的检测极限值和特异性.结果 建立了针对丙型流感病毒HE、NP、MP和NS基因的快速、可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法,同时制备了RNA标准品.结论 本文建立的丙型流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法,可以在日常监测和临床鉴定中快速、准确地检测丙型流感病毒.
关键词： 流感病毒 丙型流感病毒 实时荧光定量-反转录聚合酶链 检测
