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Ficoll及Percoll分离、纯化金黄地鼠肝细胞方法比较研究
目的 建立经济有效的原代地鼠肝细胞分离纯化方法,并比较Ficoll及Percoll两种分离液分离出的肝细胞纯度及活性的差异.方法 对传统的两步原位胶原酶灌流法进行简化,行肝脏原位灌流,离体后Ⅳ胶原酶进行消化;采用Ficoll及Percoll两种细胞分离液进行分离、纯化;纯化后于37 ℃ 5% CO2培养箱内孵育培养,0.4%台盼蓝拒染实验检测肝细胞的存活率.结果 Ficoll及Percoll分离的地鼠肝细胞总数分别为(1.46±0.91)cells·g-1肝组织、(1.79±0.89)cells·g-1肝组织,即时分离的肝细胞活力和纯度相近,都大于95%,但后期二者差异较大,Percoll分离得的肝细胞活率较高,且细胞活性下降较缓慢.结论 通过简化的门静脉原位灌流法和低浓度胶原酶离体消化,Percoll或Ficoll分离液纯化,即时分离的肝细胞可保持良好的功能和活力,二者无显著差别,但从细胞培养的要求出发,Percoll优于Ficoll分离液.
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脂肪干细胞上清液培养雪旺细胞的实验研究
目的:研究应用脂肪干细胞上清液培养新生小鼠雪旺细胞的可行性.方法:取新生(出生5-7天)C57BL/6小鼠的坐骨神经,采用0.2％的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后应用雪旺细胞条件培养基(SCCM)和C57BL/6小鼠的脂肪干细胞上清液(ADSC-CM)分别培养雪旺细胞.用0.2％复合胶原酶NB4差速分离纯化这两种方法培养的雪旺细胞,每48h纯化1次,共进行2次纯化.应用P75免疫荧光染色方法鉴别两组P2代雪旺细胞并比较两组雪旺细胞的纯度和生长情况.结果:脂肪干细胞上清液培养的雪旺细胞纯化两次后,数量明显增多,其纯度与雪旺细胞条件培养基相比没有明显差异(P＞ 0.05).结论:脂肪干细胞上清液可以较好的培养雪旺细胞,可以作为一种新的廉价方便的培养基代替雪旺细胞条件培养基来培养许雪旺细胞.
