您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
SYBRGreen实时PCR文献资料
-
非O1非O139群霍乱弧菌多重PCR和SYBR Green实时PCR检测方法的建立
目的 建立检测非O1非O139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBR Grcen实时PCR方法.方法 分别以霍乱弧菌的外膜蛋白基因(ompW)、O1和O139群O抗原编码基因(rfb)设计引物,建立多重PCR和SYBR Green实时PCR方法,评价两种方法检测非O1非O139群霍乱弧菌的特异性、重复性和一致性及低检测菌量.结果 建立了检测非O1非O139群霍乱弧菌的多重PCR和SYBR Green实时PCR方法,根据特异性条带(多重PCR)和特异性熔解温度(SYBR Green实时PCR),两种方法均能特异性检测非O1非O139群霍乱弧菌,并能鉴别其他弧菌(5种)和肠道杆菌(3种);两种方法的低检测菌量分别为7×104 c fu/ml(多重PCR)和7×102 cfu/ml (SYBRGreen实时PCR),差异有统计学意义(P＜0.05);对实时PCR的重复性检测,批内变异系数(CV)为0.22％ ～ 0.92％,批间CV为0.27％～1.41％;经370株非O1非O139群霍乱弧菌的检测,两种方法的一致性均为100％.结论 建立的两种方法其特异性、敏感性及重复性均好,可适用于不同条件下非O1非O139群霍乱弧菌的检测和鉴定.
