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鸡蛋过敏人群中主要过敏原的反应性及卵类粘蛋白抗原表位的初步研究
目的 分析年龄、性别对鸡蛋过敏人群中主要过敏原反应性的影响,初步探索我国鸡蛋过敏儿童卵类粘蛋白的主要抗原表位.方法 以卵类粘蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白纯品为抗原,采用免疫斑点印迹,检测21例鸡蛋过敏儿童血清特异性免疫球蛋白E(SIgE)与蛋白反应性,分析年龄、性别因素对过敏原反应性的影响;应用DNAStar生物分析软件,预测并合成卵类粘蛋白抗原表位肽段,采用免疫斑点印迹检测抗原表位与鸡蛋过敏儿童血清的反应性.结果 A(≤1岁)组、B组(2～3岁包括3岁)、C组(＞3岁)的卵类粘蛋白反应率差异有统计学意义(P＜0.05),卵白蛋白、卵转铁蛋白反应率各组间均差异无统计学意义(P＞0.05);性别对各过敏原的反应率差异无统计学意义(P＞0.05);卵类粘蛋白抗原表位反应率较低.结论 卵类粘蛋白sIgE在不同年龄段存在差别,卵白蛋白sIgE在21例患者均可检测出,卵转铁蛋白sIgE在各年龄段无明显差别;应用DNAStar生物软件预测的卵类粘蛋白抗原表位,在天津地区反应性低,不是该地区主要抗原表位.
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鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达
目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础.方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白.结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633 bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%.该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21 kD,与理论值均相符.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE 分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21 (DE3) 中高效表达.结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础.
