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建立同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定烘焙食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白
目的 建立用于测定烘培食品中来源于鸡蛋的3种主要致敏蛋白溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的超高效液相色谱-串联质谱法.方法 筛选溶菌酶、卵转铁蛋白、卵白蛋白的特异水解肽段,合成特异肽段及其同位素标记肽段,样品用200 mmol/L Tris-HCl(pH=8.0)匀浆提取2～3次,提取液与胰蛋白酶混匀(胰蛋白酶与蛋白质的质量比为1:50),37℃振摇酶解12h,采用电喷雾正离子模式下多反应监测(MRM),同位素内标法定量.结果 9条特异水解肽段标准溶液在1～100 nmol/L范围内线性良好,相关系数(r2)均＞0.995,烘培食品中3种致敏蛋白的定量限为0.4～ 10.0 μg/g,回收率在65.0％～108.5％之间,相对标准偏差(RSD)＜ 15.0％.结论 方法灵敏度和特异性高,适用于烘培食品中来源于鸡蛋的3种致敏蛋白的检测.
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临床生化检验参考方法及其主要分析原理
介绍临床生化检验参考方法的作用、特性和目前生化检验参考方法的主要分析原理,为参考方法建立和应用工作提供参考.参考方法是参考系统的关键组成部分,是临床检验标准化的重要基础.参考方法需具有明确的、符合特定要求的测量不确定度,因而需基于可靠测量原理.对于有机小分子生化检验项目,其参考方法一般基于仪器分析原理,其中的同位素稀释质谱(ID/MS)原理在理论上为可靠,是目前国际上所主要采用的参考方法分析原理.但ID/MS分析成本高,其他仪器分析原理可能也将在临床检验标准化中发挥重要作用.
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同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清总胆固醇
目的 建立同位素稀释液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)测定血清总胆固醇的方法.方法 血清样品中加入[3,4-13C2]-胆固醇作内标,用氢氧化钠水解血清胆固醇酯为胆固醇,用三氧化铬-硫酸氧化胆固醇为胆甾-4-烯-3,6-二酮,用LC/MS/MS分析胆固醇氧化产物,采用大气压化学电离源,用多反应监测(MRM)模式和选择离子监测(SIR)模式检测,用修正标准曲线法对血清样品进行定量.结果 两种检测模式的峰面积比与胆固醇浓度的线性相关系数均大于0.999 9.MRM模式测定血清总胆固醇的平均批内变异系数(CV)为0.95%(范围0.92%～0.99%),平均总CV为0.86%(0.82%～0.89%);SIR模式平均批内CV为0.64%(0.54%～0.77%),平均总CV为0.69%(0.62%～0.81%).测定国际或国家标准物质结果与靶值的平均偏差在MRM模式下为0.23%(0.14%～1.00%),SIR模式为0.24%(0.07%～1.27%).结论 成功建立了LC/MS/MS测定血清总胆固醇的方法,方法特异、精密、简便,可望用作血清胆固醇测定的参考方法.
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同位素稀释气相色谱质谱法测定血清孕酮
目的 建立一种血清孕酮测定候选参考方法.方法 以[3,4-13C2]孕酮为内标,用正己烷提取血清,以羟丙基-β-环糊精水溶液对提取液作净化处理,用七氟丁酸酐对孕酮进行衍生化.用气相色谱分离衍生产物,质谱选择离子监测模式检测孕酮与内标的特定碎片离子,用包括法定量.结果 血清孕酮测定的总变异系数为0.69%～2.12%,平均分析回收率为98.3%～100.1%.分析血清孕酮标准物质,测定结果与靶值的偏差小于1.5%.结论 建立的同位素稀释气相色谱质谱测定血清孕酮的方法,准确、精密,可望作为测定血清孕酮的参考方法.
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同位素稀释质谱法测定人血浆中奥氮平的方法学及生物等效性研究
建立简便、可靠、灵敏的同位素稀释质谱法测定血浆中奥氮平的浓度.50μL血浆样品中加入稳定同位素(奥氮平-D3)为内标,经特丁基甲醚提取后进样分析.色谱柱为Xbridge Shield RP 18(100 mm×2.1 mm,3.5 μm,Waters).乙腈-缓冲液(氨水-醋酸铵,pH 8)为流动相,等度洗脱,流速0.4 mL·min-1.扫描方式为正离子多离子反应监测(MRM).定量下限均为0.1 ng·mL-1,线性范围为0.1～30 ng·mL-1.对特异性、线性、准确度、精密度、回收率、介质效应均进行了方法学考察,且各项结果均符合要求,可以用于奥氮平的生物等效性研究.
