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PCR-焦磷酸测序检测单核细胞增生李斯特氏菌研究
目的 建立结合PCR-焦磷酸测序检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法.方法 根据单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因设计扩增引物和测序引物,特异地扩增目的片段,再制备单链模板,在测序引物引导下进行焦磷酸测序,通过测序结果与GenBank中的hly基因序列的比对进行鉴定.结果 扩增引物和测序引物表现出良好的特异性,16株单核细胞增生李斯特氏菌菌株均扩增出大小249 bp的DNA片段,焦磷酸测序结果与hly基因序列100％匹配,而阴性对照菌株均未扩增出DNA条带,焦磷酸测序结果为阴性.结论 建立的方法特异性高,是快速从DNA序列水平上检测单核细胞增生李斯特氏菌的有效手段.
关键词： PCR-焦磷酸测序 单核细胞增生李斯特氏菌 DNA碱基序列 hly基因 -
合肥市市售猪肉产单核细胞李斯特菌分离及hly基因序列分析
目的 了解市售猪肉中产单核细胞李斯特菌(Lm)的污染状况及Lm分离菌株hly基因部分序列的分析比较.方法 菌株分离鉴定应用多聚酶链反应(PCR);PCR产物直接测序,对780bp片段作序列分析.结果 市售猪肉产单核细胞李斯特菌的污染率为1.17%(2/170);分离菌株WLD1和FCY1与国内外14个参考菌株的同源性分别为96.4～98.6 %和95.0%～97.2%,而两者之间的同源性仅为95.9%.结论 合肥市市售猪肉中有一定程度产单核细胞李斯特菌的污染,且存在李斯特菌病的可能性和食物中毒的潜在危险;分离菌株WLD1和FCY1,尤其是FCY1分化程度较高,Lm hly基因核苷酸序列差异的距离与地理分布、菌株的样品来源无一定的相关性.
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焦磷酸测序法检测单增李斯特菌
目的:建立单增李斯特菌的焦磷酸测序检测方法.方法:通过焦磷酸测序法对hly基因的保守片段进行测序来检测单增李斯特菌,从基因序列上对单增李斯特菌进行鉴定.结果:焦磷酸测序法可准确鉴定94株单增李斯特菌.结论:本方法可用于单增李斯特菌的检测鉴定,具有准确、快速和实时等优点,可满足对单增李斯特菌快速、高通量检测的需求.
