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利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因定点突变的大鼠模型
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因特定位点突变的大鼠模型.方法:根据FARS2基因序列,设计FARS2基因特异性的单链向导RNA(sgRNA)引物序列并克隆入pU57-T7-GDNA载体.利用T7RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA.将体外转录的sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入SD大鼠受精卵,通过PCR和基因测序对FARS2基因特定位点突变进行检测和鉴定.繁育FARS2基因敲除大鼠并分析后代突变情况.结果:基因测序证实成功构建表达sgRNA载体,成功将sgRNA和Cas9 mRNA直接注射人大鼠受精卵.基因测序鉴定获得5只F0代初建鼠.DNA测序结果证实5号大鼠(ID#5)发生了gac＞ tac突变,该突变并可遗传至子代大鼠.结论:利用CRISPR/Cas9技术成功制备FARS2基因定点突变的大鼠模型,为进一步研究FARS2的功能奠定了基础.
关键词： CRISPR/Cas9 FARS2 sgRNA 遗传性痉挛性截瘫 基因敲除大鼠
