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caspase非依赖的细胞凋亡途径文献资料
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抗RIP3抗体的制备及其亚细胞定位
目的:制备兔抗受体相互作用蛋白-3(RIP3)的抗体,并探讨其在鼠源NIH3T3细胞株中的定位.方法:用RT-PCR技术从NIH3T3细胞株中克隆鼠rip3基因,进行原核表达及电洗脱纯化.以高纯度的RIP3抗原免疫新西兰兔制备抗血清并纯化.用Western blot检测该抗体的特异性,以免疫荧光法确定RIP3在NIH3T3细胞株中的定位,以及TNF-α和z-VAD.fmk对其定位的影响.结果:获得特异性的兔抗RIP3蛋白的抗体.免疫荧光的结果显示,RIP3定位于细胞质中.单用TNF-α或z-VAD.fmk处理NIH3T3细胞后,RIP3的定位均无明显变化;而用z-VAD.fmk和TNF-α共同处理细胞后,在核内外均有RIP3分布.结论:成功地克隆rip3基因并制备高特异性的兔抗RIP3抗体.RIP3在NIH3T3细胞株中定位于细胞质中,为进一步研究RIP3在TNF-α诱导的caspase非依赖的细胞凋亡途径中的作用奠定了基础.
关键词： RIP3 多克隆抗体 亚细胞定位 caspase非依赖的细胞凋亡途径
