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人转铁蛋白受体文献资料
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抗转铁蛋白受体抗体的筛选和鉴定
目的:从全人源噬菌体抗体库中筛选抗转铁蛋白受体(TfR)的抗体.方法:从HeLa细胞中提取总RNA,分两段反转录TfR胞外区cDNA,经两轮PCR后,获得胞外区基因.测序正确后,将其插入表达载体pPROEXTMHTa中,并在E.coli BL21(DE3)中表达.目的蛋白通过Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化、复性.用复性的TfR包被免疫管,从库容为1013 cfu/L的全合成人源噬菌体单链抗体库中,筛选抗TfR的抗体.结果:得到约1.9 kb的TfR胞外区基因,该基因以包涵体的形式在大肠杆菌中表达;利用纯化、复性的TfR从抗体库中筛选到了8个可与人TfR特异性结合的单链抗体.结论:利用TfR在大肠杆菌表达的复性产物,可以筛选到与天然TfR特异性结合的单链抗体.
