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冠状病毒(SARS-CoV)文献资料
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一株变异SARS冠状病毒N蛋白的原核表达及活性测定
目的:克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白的DNA,构建原核表达质粒pGEX-2T/N,并诱导表达.方法:采用RT-PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段,并克隆入T-EASY载体中.经PCR、双酶切鉴定后,测序.将N蛋白基因序列定向插入原核表达载体pGEX-2T中,表达融合蛋白.用表达产物与抗SARS-CoV抗体阳性血清做Westernblot.结果:N蛋白DNA测序的结果与GenBank比对缺失20个bp.GST-N融合蛋白以可溶形式表达.Western blot检测表明,其与抗SARS-CoV抗体阳性血清的反应呈阳性.结论:成功地构建原核表达质粒pGEX-2T/N,并表达GST-N融合蛋白,为下一步的研究奠定了基础.
关键词： 严重急性呼吸综合征 冠状病毒(SARS-CoV) N蛋白 变异 表达 -
抗SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用
目的:研制抗SARS-CoV N蛋白的单克隆抗体(mAb).方法: 以纯化的GST-N免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备抗SARS-CoV N蛋白mAb; 用免疫双扩散鉴定Ig亚类; Western blot和免疫组化鉴定mAb的特异性; 间接ELISA检测mAb的腹水效价、相对亲和常数.结果: 获得1株可分泌特异性mAb的抗SARS-CoV N蛋白的杂交瘤细胞系3E10H, Ig亚类为IgG2b; 其腹水效价为8×10-5; 其相对亲和力1.725×10-10 mol/L, Western blot和免疫组化阳性.结论: 获得特异性抗SARS-CoV N蛋白的mAb, 为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件.
关键词： 冠状病毒(SARS-CoV) N蛋白 单克隆抗体
