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伴侣10文献资料
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HIV-1 Tat基因的融合构建及在大肠杆菌中的高效表达
目的: 在E.coli BL21(DE3)中高效表达Tat蛋白. 方法: 用PCR方法构建HIV-1 Tat基因全序列, 同时将Tat基因进行定点突变(AAG28替换为CAG, AAG50替换为CAG), 以消除天然Tat蛋白的转录活性.将突变的Tat基因与伴侣10(chap10)基因连接后, 共同亚克隆入表达载体pET28a中, 并在E.coli中表达, 表达产物用Western blot进行鉴定. 结果: 分别通过3轮PCR, 成功地构建了Tat基因全序列.构建的重组质粒pET28a-chap10-Tat在E.coli BL21(DE3)中得到高效表达.Western blot分析表明, 在相对分子质量(Mr)为24 000处有1条特异性的带. 结论: chap10基因与 HIV-1 Tat全基因的融合构建, 使Tat蛋白在大肠杆菌中得到高效表达, 为其在爱滋病发病中作用研究奠定了基础.
