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tumstatin45-132基因文献资料
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血管形成抑制因子tumstatin45-132的基因克隆、表达和生物学活性
目的: 克隆人tumstatin全长编码区基因及编码tumstatin45-132的基因, 在大肠杆菌中表达. 方法: 采用RT-PCR从人胚肾细胞系293细胞中克隆人的tumstatin全长编码基因, 继以PCR扩增tumstatin45-132(45-132位氨基酸)编码基因, PCR产物克隆到pBV220载体中, 测序证实后, 转化E.coli BL21, 于42℃进行热诱导表达. 用SDS-PAGE分析表达产物, 对重组蛋白纯化后用内皮细胞增殖试验测定其生物学活性. 结果: RT-PCR扩增出tumstatin全长编码基因, 以PCR扩增出tumstatin45-132的编码基因, 经序列分析证实与GenBank中的序列完全一致.以含有tumstatin45-132编码基因的表达载体转化E.coli BL21后, 可表达出相对分子质量(Mr)为9 600的重组蛋白.表达产物的蛋白量占菌体蛋白量的10%, 纯化后能抑制内皮细胞的增殖.结论: 成功克隆全长tumstatin cDNA, 并在大肠杆菌中表达重组tumstatin45-132蛋白, 证实其具有抑制内皮细胞增殖的活性.
关键词： tumstatin45-132基因 表达 生物学活性
