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人IL-13文献资料
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野生型及突变型人白细胞介素13的原核表达及活性分析
目的:在大肠杆菌中表达野生型和突变型重组人IL-13,经纯化复性获得具有有活性的蛋白.方法:用PCR扩增IL-13基因片段,用定点突变PCR获得其突变体(IL-13' )基因.将IL-13和IL-13'基因分别克隆至原核表达载体pET30a(+)中,构建重组体pET30a(+)IL-13和pET30a(+)IL-13',分别命名为pETIL-13和pETIL-13'.以重组体转化E.coli BL21(DE3)在IPTG诱导下进行表达.表达产物用Ni-NTA层析柱进行纯化.纯化产物用氧化还原谷胱甘肽系统透析复性后,检测其生物学活性.结果:在E.coli BL21(DE3)中表达了IL-13/IL-13' -His6融合蛋白.经 SDS-PAGE显示,融合蛋白的Mr约17 000,经Western blot证实为人IL-13.表达的融合蛋白以包涵体的形式存在,纯化后得到较高纯度的重组蛋白.复性后的包涵体检测具有生物学活性.结论:成功地获得具有生物学活性的野生型和突变型人IL-13重组蛋白,为下一步研究奠定了基础.
