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NOD样受体(NLR)文献资料
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嗜肺军团菌MOMP通过激活NOD2/RIP2信号通路抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能并增强其趋化能力
目的 探讨嗜肺军团菌主要外膜蛋白(MOMP)对RAW264.7巨噬细胞吞噬功能和趋化功能的影响并探讨其机制.方法 采用MOMP与RAW264.7巨噬细胞进行体外共培养,用CCK-8法检测MOMP对RAW264.7巨噬细胞的毒性,确定半数抑制浓度(IC50).采用(1.14、0.57、0.28)μg/mLMOMP分别处理RAW264.7巨噬细胞,并设细胞对照组.RAW264.7巨噬细胞处理24、48、72 h,收集细胞和培养上清,用中性红吞噬实验检测巨噬细胞的吞噬功能;用TranswellTM小室检测巨噬细胞的趋化功能;ELISA检测细胞培养上清单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和白细胞介素10 (IL-10)的含量;实时定量PCR检测巨噬细胞核苷酸结合寡聚结构域1(NOD1)、NOD2、受体相互作用蛋白2(RIP2) mRNA水平,Western blot法检测NOD1、NOD2、RIP2的蛋白水平.结果 CCK-8法检测MOMP对RAW264.7巨噬细胞的IC50为5.69 μg/mL;与对照细胞相比,MOMP处理引起RAW264.7巨噬细胞吞噬功能降低且呈剂量和时间依赖性;随着MOMP剂量的增加,巨噬细胞的趋化能力及细胞培养上清中MCP-1、IL-10的分泌水平增加,并在36 h达到峰值;NOD2、RIP2的mRNA和蛋白表达水平也增加,NOD2和RIP2的mRNA水平在12 h达到高峰,蛋白水平在24h达到峰值.结论 MOMP抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能并增强其趋化功能,与激活NOD2/RIP2信号通路有关.
关键词： 嗜肺军团菌 主要外膜蛋白(MOMP) 巨噬细胞 吞噬功能 趋化功能 NOD样受体(NLR)
