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盐酸氨基葡萄糖对关节内出血引起的软骨损伤修复作用研究
目的 探讨盐酸氨基葡萄糖(glucosamine-hydrochloride,Glu/Ch)对关节内出血引起的软骨损伤(blood-induced joint damage,BJD)修复作用.方法 取健康成年新西兰大白兔32只,随机分为高剂量Glu/Ch组(A组)、低剂量Glu/Ch组(B组)、阳性对照组(C组)、阴性对照组(D组),每组8只.A、B、C组制备关节内出血模型,D组不建模.建模后第1天开始A、B组每天以Glu/Ch灌胃(剂量分别为250、21.5 mg/kg)8周,C、D组以生理盐水灌胃8周.建模后3、7d及2、8周检测关节损伤标志物血清软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)、血清硫酸软骨素846(chondroitin sulfate 846,CS846)、尿Ⅱ型胶原羧基端前肽(C-terminal telopepide of typeⅡcollagen,CTX-Ⅱ)浓度.8周时处死动物,抽取关节液采用ELISA法检测炎性因子IL-1β3、TNF-α浓度.取关节软骨组织分别行免疫组织化学染色,测量基质金属蛋白酶13 (matrix metalloproteinase 13,MMP-13)表达量;行阿尔新蓝、番红O染色,计算阳性染色面积百分比;对关节软骨中的蛋白多糖含量行半定量检测.结果 建模后3dA、B、C组COMP浓度显著高于D组(P＜0.05),B、C组高于A组(P＜0.05);7dA、B、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),且均低于C组(P＜0.05);2、8周各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).各时间点各组间CS846浓度比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).各时间点A、B、C组CTX-Ⅱ浓度均显著高于D组(P＜0.05);除3d外,7d及2、8周时,A组CTX-Ⅱ浓度显著低于B、C组(P＜0.05).建模后8周,A、B组TNF-α浓度显著高于D组、低于C组(P＜0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).A、B、D组IL-1p浓度显著低于C组(P＜0.05),A、D组低于B组(P＜0.05),A、D组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学染色示,C组MMP-13表达量显著高于A、B、D组,A、B组高于D组(P＜0.05),A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).各组均见阿尔新蓝及番红O阳性染色,其中D组染色范围大、着色深,其次分别为A、B、C组;两种阳性染色面积百分比各组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).各组关节软骨蛋白多糖相对含量由低到高依次为C、B、A、D组,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 兔关节出血模型会引起关节软骨代谢异常和滑膜炎性反应,每天给予Glu/Ch 250 mg/kg灌胃能在一定程度上阻止BJD,其作用机制可能是减少炎性反应引起的关节损伤,下调IL-1p、TNF-α、MMP-13,增加蛋白聚糖合成.
