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促凋亡新基因PNAS-4在基因治疗领域的研究进展及其分子机制假说
PNAS-4是新近发现的一个促凋亡的新基因.近年来PNAS-4在肿瘤基因治疗基础研究有大量的报道,PNAS-4基因治疗及联合化学药物治疗或放疗显示了较好的应用前景,但PNAS-4促凋亡的分子机制尚不完全清楚.本文综述了近年来PNAS-4在肿瘤基因治疗领域的研究进展,并着重对PNAS-4促凋亡的分子机制的现有假说进行概括.根据PNAS-4新发现的结构域特征,笔者提出PNAS-4可能是作为一种新的去SUMO化异肽酶,通过去蛋白SUMO化来调节某些与凋亡相关的靶蛋白的功能,从而发挥促凋亡的功能.
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人凋亡相关新基因PNAS-4的克隆、原核表达与纯化
目的 克隆人的凋亡相关新基因PNAS4到原核表达载体,表达并纯化人的PNAS-4蛋白.方法 用RT-PCR的方法从人肺腺癌A549细胞中扩增出人的PNAS4基因.将其克隆到pGEX-6P-1载体,转化到大肠杆菌BL21.用IPTG诱导表达,并用亲和层析的方法纯化出人的PNAS-4蛋白;然后使用质谱分析鉴定纯化后的蛋白质.结果 扩增出的人PNAS4基因与GenBank上的序列完全一致.纯化的人PNAS-4融合蛋白在相对分子质量约50×103处可见特异性条带;经质谱鉴定证实所纯化的蛋白质为PNAS-4融合蛋白.结论 成功表达和纯化了人PNAS-4蛋白,为今后对人PNAS-4基因的功能研究打下基础.
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小鼠凋亡相关新基因PNAS-4真核表达载体的构建、表达及体外抗肿瘤作用
目的:对小鼠凋亡相关新基因PNAS-4(mPNAS-4)进行克隆,构建其真核表达载体,并在小鼠Lewis肺癌细胞系LL2中转染表达;探讨mPNAS-4基因转染LL2细胞过表达所诱导的体外肿瘤细胞凋亡情况.方法:用RT-PCR从小鼠肝脏组织中克隆mPNAS-4编码区cDNA,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4;用脂质体将pcDNA3.1(+)-mPNAS-4转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞;用RT-PCR检测转染细胞中mPNAS-4的过表达情况;通过MTT、流式细胞术(FCM)及DNA Ladder分别检测转染细胞的增殖与凋亡情况.结果:从小鼠肝脏组织中克隆到mPNAS-4全长cDNA并成功构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)-mPNAS-4,转染小鼠Lewis肺癌LL2细胞可使其mRNA表达明显上调.mPNAS-4过表达能抑制LL2细胞增殖并诱导其凋亡.结论:mPNAS-4过表达对小鼠Lewis肺癌LL2细胞的生长有明显的抑制和诱导凋亡作用.
