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胚鼠大脑皮质神经元的佳分离和培养方法的探讨
用不同类型酶消化法及单纯机械法分离胚鼠大脑皮质,并分别采用两种不同的培养基进行神经元的体外培养以建立胚鼠脑皮质神经元的佳分离和培养方法.结果表明:采用0.05% 胰蛋白酶+0.05% II型胶原酶消化,以神经元完全培养基作为培养基质可获得高纯度、高活性的大脑皮质神经元.
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脑源性神经营养因子对体外培养大鼠胚脑皮质神经元缺氧的保护作用
目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对体外培养大鼠胚脑皮质神经元在低氧适应过程的保护作用.方法对胚鼠皮质神经元进行体外培养, 观察透射电镜下缺氧诱导大鼠胚脑皮质神经元损伤的超微结构变化;采用MTT比色法检测正常对照组(A组)、不同缺氧时间点皮质神经元缺氧对照组(B组)及缺氧培养前24 h和缺氧即刻加入不同剂量外源性BDNF实验组(C组)神经细胞存活率差别;4'、6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸染色法结合凋亡细胞的原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果遭受缺氧损伤的大鼠胚脑皮质神经元超微结构显示缺氧可以诱导神经细胞坏死、凋亡和混合型细胞死亡;以神经元缺氧为敏感的0~10 h为研究时间,C组在缺氧0~6 h时细胞活性显著高于缺氧对照组B组( P <0.05),凋亡神经细胞百分率低于缺氧对照组B组( P <0.05).结论缺氧可诱导体外培养大鼠胚脑皮质神经元死亡,早期加入外源性BDNF可以使神经元对低氧的耐受性增强而发挥其对神经元的保护作用.