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人端粒酶区转录酶文献资料
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质粒介导的RNAi抑制端粒酶活性
为了探讨靶向人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体是否具有抑制HeLa细胞端粒酶活性的能力,人工合成2条64个核苷酸(nt)的片段,其中19nt与hTERT基因1789-1807位碱基同源,将其退火、连接到质粒pSUPER中,构建pSUP-hTE.在pSUP-hTE基础上,把该质粒的启动子和64nt插入片段酶切、克隆到质粒pEGFP-C1中生成pEGFP- hTE,从而获得新霉素抗性筛选质粒.将pEGFP- hTE用脂质体转染HeLa细胞,G418筛选后获得抗性克隆并将其收获、传代,用不同方法检测hTERT的mRNA和蛋白表达水平、HeLa细胞的端粒酶活性以及细胞的增殖能力.结果显示,pEGFP-hTE转染的HeLa细胞与对照组比较,hTERT的mRNA水平下降及蛋白表达减少、细胞端粒酶活性降低38%,但细胞增殖能力没有明显改变.以上结果表明, pEGFP-hTE能通过RNA干扰(RNAi)途径特异性抑制HeLa细胞hTERT基因的表达,从而有效抑制细胞端粒酶活性,这可能将为肿瘤生物治疗提供一条新的途径.
