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抗志贺毒素ⅡB亚单位单克隆抗体识别表位的初步鉴定
目的 初步确定抗志贺毒素ⅡB亚单位(Stx2B)单克隆抗体(McAb)1H9、1H10、3E5识别的抗原表位.方法 运用DNAstar Protean软件,对Stx2B(1～72 aa)全抗原进行表位预测;采用截短法分段构建重组质粒Stx2B50(23～72 aa),Stx2B54(1～54 aa).用IPTG诱导表达融合蛋白.对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot 分析.结果 1H9、1H10能够识别Stx2B和Stx2B50;3E5能够识别Stx2B、Stx2B50和Stx2B54.结论 McAb 1H9、1H10识别的抗原表位位于55～72 aa,McAb 3E5识别的抗原表位位于23～54 aa.
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抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定
目的 制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体.方法 以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTrap rProtein A柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHEC O157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础.
