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赖氨酸490突变对OATP-C分子底物转运能力的影响
目的 研究人肝脏特异的有机阴离子转运蛋白基因OATP-C蛋白分子膜外区保守的490位阳离子赖氨酸对其有机阴离子底物摄取能力的影响.方法 从人肝脏mRNA中克隆OATP-C 野生型基因全长cDNA序列,通过定点突变将高度保守的第490位赖氨酸残基突变为中性氨基酸-苏氨酸,构建其C端的GFP融合蛋白的真核表达载体,转染HEK293细胞,观察突变体的细胞膜定位能力和底物摄取功能的变化.结果 OATP-C野生型及突变体均能定位表达于HEK293细胞质膜;[3H]硫酸盐雌酮底物摄取实验显示,突变体5 min底物摄取量较野生型下降了38.66%,浓度依赖的[3H]硫酸盐雌酮底物摄取动力学分析表证明,突变体Km和Vmax分别明显增高和降低.结论 OATP-C蛋白膜外区第490位赖氨酸是关键的功能氨基酸,是其重要的结构功能单位.
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OATP-C分子阳离子赖氨酸-49突变体削弱其底物摄取能力
目的 研究人肝脏特异的有机阴离子转运蛋白基因OATP-C分子膜外区保守的49位阳离子赖氨酸,对其有机阴离子底物摄取能力的影响.方法 从人肝脏mRNA中克隆OATP-C野生型基因全长cDNA序列,通过定点突变将高度保守的第49位赖氨酸残基突变为中性氨基酸-苏氨酸,构建其C端的GFP融合蛋白的真核表达载体,转染HEK293细胞,观察突变体的细胞膜定位能力及底物摄取功能的变化.结果 OATP-C野生型及突变体基因均能定位表达于HEK293细胞质膜;[3H]硫酸盐雌酮底物摄取实验显示,突变体5 rain底物摄取量较野生型下降74.18%,浓度依赖的[3H]硫酸盐雌酮底物摄取动力学分析表明,突变体Km增高和vmax降低.结论 OATP-C蛋白膜外区第49位赖氨酸是其关键的功能氨基酸,是其重要的功能结构单位.
