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重组酶介导扩增技术快速检测沙门菌方法的建立
目的 采用重组酶介导核酸扩增方法(Recombinase aided amplification,RAA),建立沙门菌快速检测方法.方法 根据沙门菌的invA基因设计引物和探针,通过构建含目的基因片段的质粒分析RAA方法的灵敏度,通过检测大肠杆菌、志贺菌验证方法的特异性,并检测沙门菌阳性样本进行验证.结果 建立的方法在39℃下进行,检测时间在20min以内,检测下限为102拷贝/μl,与大肠杆菌、志贺菌无交叉反应,特异性良好.结论 建立的RAA检测方法具有快速、灵敏、特异以及操作简便等特点,适用于沙门菌的快速检测.
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重组酶介导扩增方法快速检测寨卡病毒
目的 建立寨卡病毒一步法重组酶聚合酶等温扩增检测方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),为国境口岸提供现场快速检测方法.方法 根据寨卡病毒基因组保守片段NS2a设计引物和探针,建立寨卡病毒RT-RAA检测方法.用合成的含有寨卡病毒基因序列的质粒测试方法的重复性和灵敏度,用登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒核酸测试方法的特异性.结果 寨卡病毒一步法RT-RAA检测时间短(＜20min),对寨卡病毒阳性质粒检测下限为103拷贝/μl,重复性好,与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒无交叉反应.结论 建立的寨卡病毒一步法RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适用于口岸现场快速检测.
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重组酶介导扩增方法快速检测A族乙型溶血性链球菌
目的 利用重组酶介导核酸扩增技术(RAA)建立快速检测A族乙型溶血性链球菌的方法.方法 根据A族乙型溶血性链球菌细胞包膜蛋白酶A(CepA)基因的保守序列设计引物和探针,通过构建含有目的基因片段的质粒分析方法的灵敏度,通过检测沙门菌、大肠杆菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌标准菌株分析方法的特异性.结果 建立的RAA方法在39℃,短时间内(＜20 min)完成检测,灵敏度为10拷贝/μl,与沙门菌、大肠杆菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌标准菌株无交叉反应,具有良好的特异性.结论 建立的RAA方法速度快、特异性强、灵敏度高,适用于A族乙型溶血性链球菌的快速检测.
关键词： A族乙型溶血性链球菌 重组酶介导扩增 分子检测 -
重组酶介导恒温扩增技术检测疟原虫方法的建立?
本研究利用重组酶介导恒温扩增RAA技术，建立了一种快速检测疟原虫的方法。选取疟原虫18S rDNA序列，设计了检测疟原虫的通用引物，并对引物进行筛选和特异性检测。筛选出4组扩增效果较好的引物。该方法整个反应过程在37℃下进行，扩增时间短（40 min），并具有良好的特异性。结果表明，成功建立了一种检测疟原虫的RAA法，并且该方法适合于进出口岸疟原虫的快速检测。
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逆转录重组酶介导扩增技术快速检测基孔肯雅热病毒
本研究通过使用逆转录酶,将基孔肯雅热病毒RNA首先逆转录为cDNA.选取基孔肯雅热病毒保守序列设计引物及探针,建立基孔肯雅热病毒重组酶介导一步法等温核酸扩增RT-RAA (Reverse transcription recombinase aided amplification, RT-RAA) 快速检测法,并分析其灵敏度及特异性.结果显示,该方法整个过程在39 ℃进行,检测时间短 ( <20 min),检测下限可达100 copy,并与黄热病毒、日本乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、登革病毒I型等蚊媒病毒不存在交叉反应.本文建立的基孔肯雅热病毒RT-RAA检测法,灵敏度高、特异性强、操作简便,适应于口岸基层基孔肯雅热病毒的快速检测.
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应用重组酶介导的恒温扩增法建立检测非结核分枝杆菌的方法研究
目的：建立一种恒温条件下简便快速的非结核分枝杆菌核酸检测方法，为临床指标提供参考依据。方法设计包括海分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌3种非结核分枝杆菌的特异性引物，采用重组酶介导恒温扩增技术，建立高效快速的非结核分枝杆菌检测方法。结果重组酶介导恒温扩增荧光反应在39℃下进行约20 min即可得到检测结果；重组酶介导恒温扩增技术检测3种非结核分枝杆菌的检测下限可达103拷贝／μl ，与结核分枝杆菌以及其他临床常见病原菌均无交叉反应，检测特异性为100．0％；对临床相应的非结核分枝杆菌均能很好的检测。结论该方法为非结核分枝杆菌检测提供了一种可在简便环境中特异、灵敏的快速检测手段。
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重组酶介导扩增方法快速检测黄热病毒
目的 本研究采用重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA),通过使用逆转录酶,建立黄热病毒的一步法等温核酸扩增(RT-RAA)方法.方法 根据黄热病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析RT-RAA的重复性、特异性、灵敏度;以所建立方法对黄热病毒样本进行检测,同时以基因测序进行验证.结果 黄热病毒RT-RAA扩增,体系中加入40U的逆转录酶扩增效果佳.该方法检测时间短(＜20 min),并且灵敏度高,检测下限可达100 copy,与登革病毒、西尼罗病毒、日本乙型脑炎病毒、基孔肯雅热病毒等蚊媒病毒无交叉反应,具有良好的特异性.结论 构建的黄热病毒RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适应于黄热病毒的口岸快速检测.
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实时荧光重组酶介导核酸扩增在疟原虫快速检测中的应用研究
疟疾是严重危害人类健康的全球性虫媒传染病之一,遍及全球90多个国家和地区,主要分布在热带和亚热带,世界上超过一半的人口生活在疟疾流行区[1].据统计,疟疾每年感染数千万人,仅在非洲,每年有50万5岁以下儿童死于疟疾,已成为全球重要的公共卫生问题之一[2].疟疾的早期诊断和治疗是其防治的关键[3].
