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一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白多克隆抗体制备
目的 获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4-binding protein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体.方法 通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228～1893 bp),目的 片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化B1221感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白).HPLC鉴定纯度.利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,井经蛋白A柱纯化,非特异性扰体吸收.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性.结果 表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋门纯度达87%.IBP多克隆抗体滴度达1:51 200,能特异地和内源性IBP结合.结论 成功表达并纯化了 IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体.
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慢病毒介导shRNA抑制IRF-4结合蛋白对乳腺癌细胞生物学特性的影响
目的 慢病毒介导shRNA抑制乳腺癌细胞中免疫相关分子IRF-4结合蛋白(interferon regulatory factor-4 binding protein,IBP)的表达,观察对乳腺癌细胞生物学特性的影响.方法 针对IBP基因的4个靶点设计干扰序列,干扰慢病毒感染乳腺癌细胞构建稳定感染细胞株;Western blot检测IBP表达水平;相差显微镜观察IBP对乳腺癌细胞形态的影响;MTT实验检测IBP对细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测IBP对肿瘤细胞迁移能力的影响;裸鼠动物模型观察IBP对乳腺癌细胞皮下成瘤和肝转移能力的影响.结果 选择的干扰靶点均有效,成功构建IBP抑制的乳腺癌细胞株;IBP影响乳腺癌细胞形态,抑制IBP能降低肿瘤细胞增殖和迁移能力,同时降低肿瘤细胞的皮下成瘤和肝转移能力.结论 慢病毒介导shRNA有效抑制了乳腺癌细胞中IBP的表达,降低了肿瘤细胞的增殖和转移能力,IBP有望成为研究肿瘤免疫的新靶点.
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IBP对口腔鳞癌增殖作用的体内研究
目的 观察体内IRF-4结合蛋白(IBP)对口腔鳞癌(OSCC)细胞Tca8113生长的影响.方法 利用先前构建的高表达IBP的OSCC细胞株(Tca8113/IBP)及其空质粒对照组细胞株(Tca8113/C1)进行裸鼠成瘤试验,采用活体成像技术检测两组裸鼠接种瘤体的绿色萤光蛋白(GFP)信号.在处死裸鼠后,将接种的肿瘤组织取出并测量体积.结果 Tca8113/IBP组裸鼠显示的GFP信号区域较Tca8113/C1组显著增大,肿瘤体积也较Tca8113/C1组显著增大(P＜0.05).结论 上调IBP表达在裸鼠体内能促进OSCC细胞的增殖.
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IRF-4结合蛋白对口腔鳞癌细胞生长作用的机制研究
目的：观察IRF-4结合蛋白（ IBP）促进口腔鳞癌（ OSCC）细胞Tca8113生长的机制。方法利用实验室保存的口腔鳞癌细胞株Tca8113和先前建立的高表达IBP的口腔鳞癌细胞株Tca8113/IBP以及对照空质粒细胞株Tca8113/C1，通过流式细胞术，观察IBP过表达对Tca8113细胞周期的影响，并通过免疫印迹实验检测相关细胞周期蛋白的表达变化。结果流式细胞术显示IBP能缩短OSCC细胞的G1期，促进其进入S期，从而加快OSCC的增殖；并且Tca8113/IBP组细胞cyclin D1的表达高于Tca8113及Tca8113/C1组；而cyclin E和 P27Kip1在各组细胞中的表达未见明显变化。结论 IBP可能通过调节cyclin D1的表达从而缩短OSCC细胞的G1期，促进其进入S期，并加速OSCC细胞的增殖。
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IRF-4结合蛋白对人口腔鳞癌细胞生长作用的研究
目的 观察IRF - 4结合蛋白(IBP)对口腔鳞癌(OSCC)细胞Tca8113生长的影响.方法利用真核表达载体pEGFP - C1和pEGFP - C1/IBP,转染Tca8113细胞,通过 MTT、克隆形成实验,观察IBP过表达对Tca8113细胞生长的影响.结果 MTT 检测结果显示,上调IBP表达的Tca8113/IBP组细胞生长速度明显快于Tca8113/C1及Tca8113组;克隆形成实验结果显示,上调IBP表达能促进OSCC细胞克隆形成能力.结论 上调IBP表达能促进OSCC细胞的生长.
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IRF4结合蛋白在口腔鳞癌中的表达及临床意义
目的:探讨干扰素调节因子-4(IRF-4)结合蛋白在口腔鳞癌中的表达及意义.方法:用免疫组化检测IRF 4结合蛋白在6例正常口腔黏膜及78例口腔鳞癌组织中的表达情况,分析其表达水平与临床病理指标之间的关系.结果:在78例口腔鳞癌中有36例IRF-4结合蛋白呈阳性表达,而6例口腔正常黏膜组织中未见IRF-4结合蛋白表达.IRF-4结合蛋白的表达与口腔鳞癌大小、TNM分期及是否发生远处转移呈正相关(P＜0.05),而与其分化程度呈负相关(P＜0.05).结论:口腔鳞癌组织中IRF 4结合蛋白的高表达可能与口腔鳞癌的发生、发展相关.
