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蜡样芽胞文献资料
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实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌重组质粒标准的构建
[目的]构建蜡样芽胞杆菌16s-23sITS重组质粒,为实时荧光PCR检测蜡样芽胞杆菌提供质粒标准.[方法]选择蜡样芽胞杆菌16s一23sITS特异基因作为目的靶序列,设计、合成引物和探针,采用普通PCR扩增特异靶序列,克隆到pGM-T载体后,转化感受态大肠埃希菌DH5α,经蓝白斑筛选,再分别用EcoRI酶切,普通PCR及测序3种方法证实目的片段已成功重组.建立荧光定量PCR检测蜡样芽胞杆菌的标准曲线.[结果]成功构建目的重组质粒,并以此为标准制作荧光定量PCR标准曲线.重组质粒标准具有较大的线性范围(102copies/μl～108%opies/μl)和灵敏度.[结论]该方法构建的16s-23sITS基因重组质粒能满足实时荧光定量测定对参考标准的要求,为后续实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的推广应用提供了条件.
关键词： 杆菌 蜡样芽胞 TaqManTM探针 重组质粒 实时荧光定量PCR
