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IGF-1R基因沉默对L02细胞过氧化损伤时Caspase12表达的影响
目的：成功构建稳定沉默表达IGF-1R基因质粒，并转染至L02细胞（人正常肝细胞），观察 IGF-1R基因沉默对L02细胞过氧化损伤时经内质网途径特异性凋亡蛋白Caspase12表达的影响。方法：构建针对 L02细胞 IGF-1R 基因的短发夹状 RNA （shRNA），将4种不同序列的 Sh-H-IGF1R-1108、Sh-H-IGF1R-2797、Sh-H-IGF1R-3215、Sh-H-IGF1R-3787质粒（设为实验组）以及含与IGF-1R无关序列的Sh-H-IGF1R-V1质粒（设为阳性对照组）和空白质粒 Sh-H-IGF1R-V2（设为阴性对照组）分别转染 L02细胞，24 h 后用 RT-PCR 方法检测IGF-1R 表达水平，筛选出稳定沉默IGF-1R基因的质粒。随后进行下一步实验分组：空白对照组（A组）、过氧化损伤组（B组）、阴性质粒转染组（C组）、目的基因转染组（D组）。12 h后收集细胞，采样待测，用Western Blot 法检测各组 Caspase12表达。结果：各实验组与 Sh-H-IGF1R-V1组及 Sh-H-IGF1R-V2组比较扩增倍数均降低（P＜0．05），其中 Sh-H-IGF1R-3215组（0．02±0．01）与Sh-H-IGF1R-3787（0．05±0．05）沉默效果稳定，但后组重复性更好。 B 组（2．41±0．03）、C 组（2．45±0．02）、D 组（3．60±0．06） Caspase12表达均较A组（0．34±0．02）升高（P＜0．01），C组较B 组略升高（P＞0．05），D 组较B、C组显著升高（P＜0．01）。结论：4种针对 IGF-1R 基因沉默质粒均构建成功，并成功转染至人 L02细胞（人正常肝细胞），沉默效果理想的质粒为Sh-H-IGF1R-3787。IGF-1R靶向shRNA质粒可通过沉默L02细胞IGF-1R表达加重细胞凋亡，间接验证了IGF-1/ IGF-1R 信号通路对L02细胞过氧化损伤时经内质网途经的细胞凋亡程序活化有一定的调控作用。
