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含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒的构建及鉴定
目的 构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒疫苗,并初步评价其免疫效果.方法 将HIV-1gp120基因抗原决定簇插入到脊髓灰质炎病毒表达载体PSVA14中,构建含HIV-1gp120基因抗原决定簇的重组脊髓灰质炎病毒,通过脂质体介导法将重组脊髓灰质炎病毒转染入Hela细胞,通过PCR,酶切鉴定等方法对重组脊髓灰质炎病毒载体进行了表达鉴定,并通过氯仿-PEG/NaCl-氯仿三步法纯化重组脊髓灰质炎病毒,利用免疫酶法,Western blot方法对重组脊髓灰质炎病毒作了初步的免疫效果的研究.结果 构建的重组脊髓灰质炎病毒在Hela细胞内可以正确的表达gp120基因,并能感染293细胞而不产生细胞病变,并能随293细胞的传代被复制克隆.结论 重组脊髓灰质炎病毒能正确的表达gp120基因,并能感染人正常细胞,初步证实了其生物安全性.
关键词： HIV-1gp120 重组病毒疫苗 -
抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用
目的: 制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体(mAb),并建立一种可用于检测gp120的ELISA法.方法: 采用基因工程抗原HIV-1 gp120免疫BALB/c小鼠, 通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1 gp120的mAb.用ELISA法鉴定mAb的Ig亚类、效价及特异性.用饱和硫酸铵(SAS)纯化mAb,并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法.结果: 筛选出10株稳定分泌抗HIV-1 gp120 mAb的杂交瘤细胞株,9株为IgG,其中4株的腹水效价为32×10-4～256×10-4.所得mAb与HIV-1 gp41、HIV-1 p24及HIV-2 gp36 Ag均无交叉反应,仅与HIV-1 gp120产生特异性反应.用 mAb 6H9和9H12建立了双夹心ELISA法, 检测gp120抗原的灵敏度是10 μg/L.结论: 获得10株特异性强、效价高的抗HIV-1 gp120的mAb, 并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法.
关键词： HIV-1gp120 单克隆抗体 杂交瘤 -
HIV-1gp120基因及其与IFN-α基因共表达产物的构建和实验研究
目的研究细胞因子IFN-α在机体免疫应答过程中的免疫佐剂效应.方法以表达中国流行株HIV-1gp120基因的核酸疫苗质粒pGP及共表达中国流行株HIV-1gp120基因与IFN-α基因的核酸疫苗质粒pGPIFN-α免疫Balb/c鼠,用流式细胞仪测定10 000个免疫鼠脾淋巴细胞中CD4+,CD8+T细胞数及CD4+/CD8+比值.结果 pG-PIFN-α与pGP比较,pGPIFN-α免疫鼠CD4+和CD8+T细胞数明显提高.结论在机体的免疫应答过程中,细胞因子IFN-α能很好地发挥免疫佐剂的作用.
关键词： HIV-1gp120 IFN-α 免疫佐剂
