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短发夹结构RNA干扰文献资料
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重组人组织因子RNA干扰穿梭载体的构建及其体外鉴定
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,以人组织因子(TF)基因为靶基因,构建携带发夹结构的TF-shRNA的穿梭表达载体.方法 在以往研究的基础上,设计具有小发夹结构的TF-shRNA序列,经退火后成为互补双链,然后将其克隆至pShuttle Vector 1.0-CMV,转化E.coli DH5a菌株,提取重组穿梭质粒行酶切鉴定和测序,RT-PCR法检测其沉默TF基因的效果.结果 成功构建了携带TF-shRNA的穿梭表达栽体,经限制性内切酶酶切和测序软件分析证实,与设计序列同源性达98%以上;采用多重比较进行统计学分析结果显示,重组质粒pShuttle-TF-shRNA能显著性降低293细胞中TF mRNA表达,转染后24,48和72 h细胞中TF mRNA表达含量显著降低,有统计学意义(P=0.000).结论 成功构建了针对人TF基因的穿梭表达载体,为将TF作为治疗靶点提供了实验基础.
关键词： 组织因子 短发夹结构RNA干扰 基因沉默
