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顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制
背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP-16)为白血病化疗常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响.对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP-16联合应用具有协同效应.本研究通过DDP与VP-16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP-16疗效的作用机制.方法:采用VP-16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理.应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP-16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率.半定量RT-PCR法和Western blot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平.结果:VP-16与DDP合用具有明显的协同效应.两药合用后,细胞凋亡率明显增加.单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/ml DDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5 μg/ml VP-16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%.5 μg/ml VP-16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高.TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/ml VP-16与30μg/ml DDP联合应用时比单用VP-16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%.Western印迹检测结果与RT-PCR结果相符.结论:DDP在化疗中与VP-16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP-16提供更多的靶酶,使VP-16杀伤K562细胞效果明显提高.
