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干扰素-γ对乳腺癌细胞Her2/neu表达及131I-Herceptin抑制肿瘤细胞增殖的影响
背景与目的:利用Herceptin对Her2/neu的靶向特性,将放射性核素131I联结到Herceptin进行放免靶向治疗,是治疗转移性乳腺癌的方法之一.而肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关.本研究应用IFN-γ上调乳腺癌细胞系Her2/neu的表达,以提高131I-Herceptin在乳腺癌细胞系的结合,及131I-Herceptin对乳腺癌细胞增殖的抑制作用.方法:取对数生长期乳腺癌细胞系MCF-7、SKBR-3和BT-474,实验组以终浓度为500 U/ml的IFN-γ诱导培养48 h,对照组加入不含IFN-γ的等量培养液.诱导前后采用流式细胞仪(FACS)检测3种细胞Her2/neu的表达率及平均荧光强度(MFI).采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以高压液相层析法(HPLC)测定131I-Herceptin的放射化学纯度(RCP),以非竞争性饱和结合法测定3种细胞诱导前后131I-Herceptin的结合率(B/T).采用克隆形成实验评价诱导后131I-Herceptin对3种细胞杀伤效应的变化.实验组与对照组间Her2/neu表达率、MFI、B/T及克隆形成率的差异采用t检验.结果:MCF-7细胞Her2/neu基础表达率为(8.5±1.9)%,诱导后升高至(15.2±2.7)%(t=3.515,P＜0.05),MFI从38±7升高至121±17(t=7.823,P＜0.01);SKBR-3细胞和BT-474细胞的基础表达率分别为(98.9±1.1)%和(98.1±0.9)%,诱导后分别为(99.7±0.9)%和(99.5±1.2)%,无明显改变(P＞0.05),但MFI分别从952±125、1 020±98增高至1 608±201(t=4.802,P＜0.01)和1 968±192(t=7.614,P＜0.002)131I-Herceptin在MCF-7、SKBR-3和BT-474的基础结合率分别为(5.2±1.4)%、(35.8±4.5)%和(37.2±3.6)%,诱导后分别升高为(12.3±3.4)%、(48.9±7.1)%和(59.5±8.7)%,对131I-Herceptin的结合倍增比分别为2.4、1.4和1.6倍.实验组3种细胞的克隆形成率分别为(30±4)%、(23±5)%及(19±6%),均显著低于对照组[分别为(49±3)%、(37±6)%、(34±5)%](t=6.574、3.105、3.323,P＜0.05).结论:IFN-γ可以上调乳腺癌细胞系Her-2/neu的表达和肿瘤细胞对131I-Herceptin的结合量,因此也提高了131I-Herceptin对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.
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过表达FLJ22349促进人胚胎肾细胞HEK293及乳腺癌细胞MCF-7的生长
目的:人假想蛋白FLJ22349基因位于染色体22q13.2上,编码一个229个氨基酸的蛋白.表达谱分析发现多种肿瘤组织中有FLJ22349的表达,预测该基因可能与肿瘤的发生发展有密切关系.本研究旨在用生物信息学方法分析FLJ22349的结构和功能,并初步研究兀222349在HEK293及乳腺癌细胞中的作用.方法:运用各种生物信息学数据库初步分析兀J22349的结构和功能.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析FLJ22349基因在小鼠正常组织,人癌症细胞株及HEK293中的表达情况.将载有FLJ22349的基因的质粒转染入HEK293,MCF-7,MDA-MB 231中,观察该基因的亚细胞定位.MTT检测细胞的生长变化.结果:FLJ22349基因在人类、猩猩、恒河猴、褐家鼠、小鼠和狗中有很高的同源性,但与其它已知的基因无同源性.小鼠正常组织中有FLJ22349表达;乳腺癌细胞株MDA-MB 231,肝癌细胞株Bel-7402也有表达;主要定位于细胞核;转染FIJ22349的HEK293,MCF-7细胞株生长曲线显示促进细胞生长(P＜0.05).FLJ22349转染120h后,MTT实验观察到HEK293,MCF-7细胞的增殖率分别为299%,456%;而对照组分别为233%,272%.结论:FLJ22349基因过表达促进HEK293和MCF-7细胞的生长.
关键词： 乳腺肿瘤细胞系 HEK293 FLJ22349基因 细胞生长
