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新型胰岛分离液对小鼠胰岛分离效果的研究
目的 探讨新型胰岛分离液(IPS液)在小鼠胰岛分离中的分离效率及胰岛保护作用.方法 将消化后的小鼠胰腺按体积平均分为两组(IPS组和UW组),分别应用IPS-Optiprep液及UW-Optiprep液进行连续梯度密度离心分离胰岛,比较两组分离液的分离纯化效率和分离后的胰岛活性.将诱导成功的糖尿病小鼠随机分为3组:实验组(n=10),接受采用IPS-Optiprep液分离纯化的胰岛移植;对照组(n=10),接受采用UW-Optiprep液分离纯化的胰岛移植;假性移植组(n=5),仅给予手术但并不进行胰岛移植.分析3组小鼠术后血糖水平以及测实验组和对照组小鼠术后21 d的腹腔葡萄糖耐量试验的血糖水平.比较两种分离液的配制成本.结果 与UW组相比,IPS组的IPS-Optiprep液可提供更高的胰岛当量(IEQ)、胰岛纯度、回收率及胰岛完整度.胰岛形态观察可见,IPS组胰岛被膜完整,直径明显大于UW组.UW组纯化后的胰岛活性率高于IPS组[(88±5)%比(84±3)%,P<0.01].与UW-Optiprep液相比,IPS-Optiprep液可获得相当的在体胰岛功能.IPS-Optiprep液可显著降低胰岛分离纯化成本.结论 新型胰岛分离液IPS-Optiprep液在胰岛分离提纯中显示出较好的分离效率,增加了胰岛的纯度、完整度与回收率,并显著降低了纯化成本,但对胰岛细胞活性的保护作用稍逊,可能与胰岛的高完整度及IPS-Optiprep液中的内毒素有关.
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一种新的胰岛细胞提取方法
目的:研究猪胰岛细胞分离纯化及探索一种新的胰岛收集方法.方法:成年猪胰岛消化分离采用Calafiore的方法并加以改进.取10头供体猪的胰腺组成第一组作为对照组,对它们采用传统的胰岛分离方法.再取15头供体猪的胰腺组成第二组作为实验组,对它们采用调整后的胰岛分离方法.结果:用新的胰岛收集方法,成功的完整消化试验组15头猪胰腺中的13头.而传统的消化收集方法只能完整消化对照组10头中的4头,前提是假定完整消化的标准是消化后所剩完整的胰腺组织不到原来的5%.用调整后的方法收集胰岛,其产量提高了.而且同一组中每克胰腺组织的胰岛产量也有所增加.结论:调整后的胰岛细胞分离收集方法,能够减少早期分离出的胰岛细胞对胶原酶的接触时间,而同时又不影响其他胰腺组织的消化过程,从而有效地减少胰岛碎片的出现,使分离出的胰岛细胞尽量保持完整的结构.
