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pcDNA3.1(+)/GSTP1文献资料
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重组GSTP1真核表达质粒的构建及稳定转染NCI-H520细胞系的建立
目的 构建pcDNA3.1(+)/GSTP1真核表达载体并将其稳定转染到肺鳞癌细胞NCI-H520中,建立稳定转染的NCI-H520细胞系,为后续研究奠定基础.方法 以pDNR-LIB-GSTP1为模板,用PCR扩增GSTP1 cDNA的编码区,并将扩增的cDNA片段与载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中.重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肺鳞癌细胞系NCI-H520,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用Western blotting检测转染前后该细胞株GSTP1基因在蛋白水平的表达.结果 pcDNA3.1(+)/GSTP1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功；经Western blotting检测,重组质粒转染株中GSTP1基因的蛋白表达水平明显高于对照组,证实GSTP1基因已稳定转染到NCI-H520细胞中并得到表达.结论 成功构建了pcDNA3.1 (+)/GSTP1真核表达质粒,建立了稳定表达GSTP1的NCI-H520细胞系,为进一步研究GSTP1的生物学功能奠定了基础.
