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长链非编码GATS表达干扰质粒构建抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭的研究
目的 探讨长链非编码GA TS对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 构建的人LncRNA-GATS-shRNA1 ～4慢病毒载体转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,qPCR筛选出干扰效率为50.0％和54.0％的sh1组和sh3组,MTT法和Transwell实验分别检测转染后细胞增殖和侵袭能力;流式细胞术检测转染sh1组慢病毒后细胞周期分布及凋亡变化.结果 测序证实,LncRNA-GA TS的shRNA寡聚核苷酸序列已被克隆到p LV-GA TS载体;转染MDA-MB-231细胞后,与阴性对照组比较,sh1组和sh3组的乳腺癌细胞增殖和侵袭能力均降低(P＜0.01),以sh1组更显著;sh1组细胞周期被阻滞于S期(P＜0.01);细胞凋亡率无明显变化(P＞0.05).结论 LncRNA-GATS可能下调乳腺癌细胞侵袭力,并通过抑制细胞周期进展降低细胞增殖能力.
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小鼠NMDA受体NR2B亚基短发夹RNA干扰真核表达载体的构建与鉴定
目的 设计并构建小鼠N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)短发卡RNA干扰真核表达载体并鉴定.方法 根据NMDA受体NR2B mRNA编码序列设计并合成针对NR2B的特异性RNA干涉片段.将其克隆入pYr-1.1质粒载体,构建NR2B短发夹RNA(shRNA)真核表达载体pYr-1.1-GRIN2B-shRNA,并对其进行酶切和测序鉴定.结果 酶切和测序结果均证明NMDA受体NR2B shRNA已经插入质粒载体pYr-1.1.结论 NMDA受体NR2B shRNA 真核表达载体pYr-1.1-GRIN2B-shRNA构建成功.
关键词： 小鼠 RNA干扰 NMDA受体NR2B亚基 shRNA干扰载体 -
Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响
本实验目的在于构建Sirt1 shRNA干扰载体,探讨Sirt1对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响.设计并合成Sirt1的shRNA序列,重组到pGenesil-1.0质粒载体中筛选出pGenesil-1.0-Sirt1阳性克隆并测序.将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞,用RT-PCR、Western blot检测各细胞中Sirt1表达水平,MTT测细胞增殖活性,加入阿霉素处理三组细胞后,用MTT检测细胞凋亡情况.结果表明成功构建Sirt1 shRNA干扰载体,各细胞株中Sirt1表达水平明显下降,Sirt1 shRNA克隆细胞株增殖能力降低,阿霉素处理后,各细胞株抗凋亡能力明显减弱,Sirt1在维持细胞增殖及抗细胞DNA损伤凋亡方面发挥重要作用,为进一步研究提供理论依据.
