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下游调控元件拮抗分子文献资料
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携带DREAM基因shRNA的慢病毒载体的构建及其对坐骨神经缩窄损伤大鼠的镇痛作用
.01).结论:成功构建了携带大鼠DREAM基因有效shRNA的慢病毒载体,慢病毒携带的短发夹干扰RNA能干扰脊髓中DREAM的表达,为神经病理性疼痛的治疗提供了实验基础.
关键词： RNA干扰 神经病理性疼痛 下游调控元件拮抗分子 慢病毒载体 -
DREAM短发卡质粒载体的构建及在C6细胞中沉默DREAM基因的效应
目的 构建表达下游调控元件的拮抗分子(DREAM)基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对C6细胞DREAM基因的干扰作用,为研究DREAM基因功能提供有力工具.方法 为了构建pRNAT-U6.1/Neo载体介导DREAM shRNA表达的质粒,针对DREAM的19碱基大小的片段,分别设计3对寡核苷酸和1条非特异性阴性对照序列,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pRNAT-U6.1/Neo载体(命名为pRNAT-DREAM),两对DNA双链连接后形成中间由9个碱基序列间隔的反向互补序列,构建成能产生DREAM shRNA的质粒.用构建成功的4条质粒转染C6细胞,分别采用Realtime PCR和蛋白印迹检测其DREAM基因的mRNA和蛋白表达.结果 酶切、连接后构建成的质粒,经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变.在培养的神经胶质细胞中转染率为85%左右,pRNAT-DREAM-Ⅱ和pRNAT-DREAM-Ⅲ显著抑制DREAM基因的表达.结论 成功构建了能表达DREAM shRNA的质粒载体pRNAT-DREAM-Ⅱ、pRNAT-DREAM-Ⅲ,此项研究结果 为DREAM信号通路的深入研究奠定了基础.
关键词： RNA干扰 下游调控元件拮抗分子 质粒 栽体
