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沉默PCAF基因抑制人肾上腺皮质癌裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究
目的 探讨靶向沉默肾上腺皮质癌SW13细胞PCAF基因表达对裸鼠移植瘤生长以及血管生成的抑制作用及其机制.方法 pLenti6.3-MiRNA-PCAF重组慢病毒及pLenti6.3-MiRNA-NC重组慢病毒分别感染SW13细胞,将感染后的两组细胞及未处理的SW13细胞分别接种于15只裸鼠腋下,构建裸鼠移植瘤模型,分为实验组、阴性对照组、空白对照组,并观察各组肿瘤生长情况.Western blot、荧光定量PCR检测移植瘤组织PCAF蛋白、mRNA表达水平,HE染色法观察各组移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学法检测VEGF表达及微血管密度.结果 实验组小鼠的肿瘤体积较阴性对照组和空白对照组显著缩小,肿瘤抑制率分别为49.2％和52.9％;PCAF蛋白相对表达水平较阴性对照组下降58.4％,mRNA相对表达水平较阴性对照组下降74.3％;实验组与阴性对照组和空白对照组相比,瘤内VEGF蛋白表达明显下调;实验组微血管密度(19.4±4.2)与阴性对照组(42.7±6.5)和空白对照组(51.3±8.6)相比明显下降.结论 慢病毒介导的pLenti6.3-MiRNA-PCAF能有效抑制肾上腺皮质癌细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成.
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P300/CBP相关因子(PCAF)表达水平对人子宫内膜间质细胞增殖的影响
目的:观察P300/CBP相关因子(P300/CBP associated factor,PCAF)对人子宫内膜间质细胞增殖的调控作用.方法:通过Western blotting、实时定量PCR及Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖实验,观察分析Ad-FLAG-PCAF重组腺病毒介导的PCAF过表达及PCAF-siRNA介导的PCAF低表达对体外培养的人子宫内膜间质细胞增殖的影响.结果:获得滴度为8×1010 ifu/ml的重组Ad-FLAG-PCAF腺病毒,转染体外培养的人子宫内膜间质细胞后,可有效介导细胞内FLAG-PCAF融合蛋白的高表达；而转染PCAF特异的siRNA后,可有效抑制人子宫内膜间质细胞中PCAF的表达. PCAF过表达的人子宫内膜间质细胞中,其细胞周期标志蛋白cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著降低(P＜0.05),而PCAF低表达的人子宫内膜间质细胞中,其cyclinD1和cyclinD3的表达水平显著升高(P＜0.05)；此外,CCK-8实验结果显示,PCAF过表达能显著抑制由雌、孕激素共同刺激所引起的人子宫内膜间质细胞的增殖,而基因沉默人子宫内膜间质细胞中内源性PCAF的表达后,间质细胞的增殖增加＞20％(P＜0.05).结论:PCAF可能通过蛋白乙酰化修饰作用,参与调控人子宫内膜间质细胞的增殖过程.
