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靶向沉默RNF2基因对食管癌细胞放射敏感度的影响
目的 探讨RNF2基因表达对X射线照射后食管癌细胞放射敏感度的影响.方法 针对RNF2mRNA序列,设计合成3对有效的干扰序列(siRNA1、siRNA2和siRNA3)和阴性对照序列.瞬时转染细胞,分别命名为RNF2 siRNA1组、RNF2 siRNA2组、RNF2 siRNA3组,转染空载体组和未转染组分别命名为NC组和control组.RT-PCR和Western blot法观察食管癌ECA109细胞各组中RNF2表达变化.MTT法检测RNF2基因对ECA109增殖能力的影响.克隆形成实验检测RNF2对ECA109放射敏感度的影响.流式细胞术测定RNF2基因干扰后对细胞周期和凋亡分布的影响.结果 3对干扰序列组的RNF2基因在mRNA和蛋白表达水平低于control组和NC组,尤以siRNA1组效果明显.选择siRNA1作为干扰组进行MTT和流式细胞术检测.MTT结果表明照射后干扰组细胞增殖明显受抑;克隆形成实验的结果显示干扰组的的D0、Dq、SF2显著低于control组和NC组,而干扰组的外推数N(extrapolation number N)值明显高于后者,可见干扰组细胞的放射敏感度高于control组和NC组;流式细胞术显示照射后RNF2 siRNA组G0/G1期明显高于control组和NC组,S期显著低于control组和NC组.结论 siRNA干扰技术有效地抑制了食管癌ECA109细胞中RNF2基因的表达,联合X线照射后显著抑制了细胞增殖,消除了细胞周期阻滞在S期,增加了食管癌的放射敏感度.
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下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性
目的 在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响.方法 用含有针对RNF2基因小发夹RNA (shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FTTC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况.结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达.RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13士1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡.经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82士0.45).结论 下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性.
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RNF2和PCNA在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义
目的:探讨多梳基因家族成员环指蛋白2(RNF2)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在食管癌组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组化法检测64例食管癌患者癌组织、30例癌旁正常组织中RNF2和PCNA蛋白的表达情况,分析其与临床病理指标及预后的关系.随访并分析RNF2阳性表达与食管癌患者术后5年存活率的关系.结果:RNF2和PCNA蛋白在肿瘤组织中均高表达,RNF2在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为54.69％(35/64)和30.00％(9/30),差异有统计学意义(x2=5.000,P＜0.05);PCNA在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为60.94％(39/64)和46.67％(14/30),差异有统计学意义(x2=6.237,P＜0.05);2种蛋白的阳性表达均与食管癌的肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移有关(P＜0.05),而与患者年龄、性别、分化程度无关(P＞0.05);食管癌组织中PCNA蛋白表达与RNF2蛋白表达具有正相关关系(r=-0.494,P＜0.01).5年总生存期分析结果显示RNF2阳性表达者的生存时间更短(P＜0.01).结论:RNF2和PCNA与食管癌的发生发展密切相关,且二者在食管癌发生发展中具有协同作用.
