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应用mRNA差异显示技术克隆新的肝癌相关基因的研究
目的 研究和克隆新的肝癌相关基因,探讨肝癌发生的分子学基础.方法 采用mRNA差异显示技术(DDPCR)和逆转录聚合酶链式反应、测序等方法,分析2对肝细胞癌和癌旁组织基因表达差异情况,并用Northern印迹杂交的方法,分析所获得的基因片段在12对肝细胞癌和癌旁组织中的表达.结果 使用5条上游引物、4条下游引物,从2对肝癌和癌旁组织中获得6个新的肝癌组织高表达基因片段STW-1、STW-2、STW-3、STW-4、STW-5和STW-6,其在肝癌组织中表达的阳性率分别是:83.3%(10/12)、66.7%(8/12)、50.0%(6/12)、83.3%(10/12)、58.3%(7/12)和66.7%(8/12),且所分析的12对肝癌组织都存在2种以上的新基因片段表达.结论 用DDPCR技术获得6个新的肝癌差异表达基因片段,说明肝癌的发生、发展是多基因参与的复杂过程.
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胃良恶性病变组织中VHL和HIF-1α及其mRNA表达与MV计数的关系
目的 研究胃良恶性病变组织中VHL和HIF-1α及其mRNA表达水平和MV计数及其临床病理意义.方法 取49例胃癌,20例癌旁组织,36例淋巴结转移灶和80例不同类型胃良性病变手术切除或胃镜活检标本常规制作石蜡包埋切片,用EnVisionTM免疫组化法检测VHL和HIF-1α表达和MV计数,用原位杂交法检测VHL和HIF-1α mRNA表达.结果 胃癌组织VHL及其mRNA表达阳性率明显低于癌旁组织及各类型胃良性病变(P<0.05或P<0.01),胃癌组织HIF-1α及其mRNA表达阳性率明显高于癌旁组织及各类型胃良性病变(P<0.05或P<0.01),胃癌组织MV计数明显高于癌旁组织和各种类型胃良性病变(P<0.01),VHL及其mRNA阴性表达和(或)HIF-1α及其mRNA阳性表达的癌旁组织及胃良性病变黏膜上皮均呈轻至重度不典型增生;胃癌原发灶与相应淋巴结转移灶比较VHL和HIF-1α及其mRNA表达阳性率及MV计数间,差异无统计学意义(P>0.05).胃癌组织学分级Ⅱ级、浸润深度T1+T2、无淋巴结转移及无远处转移病例HIF-1α及其mRNA表达阳性率及MV计数明显低于组织学分级Ⅲ+Ⅳ级、浸润深度T3+T4、区域淋巴结转移及远处器官转移者(P<0.05或P<0.01),但VHL及其mRNA表达阳性率则与HIF-1α相反(P<0.05或P<0.01);N1站淋巴结转移者VHL及其mRNA表达阳性率明显高于N2+N3站淋巴结转移病例(P<0.05);VHL和HIF-1α及其mRNA在胃癌组织中表达呈高度不一致性(X2VHL=14.66,P<0.01;X2VHL mRNA=6.74,P<0.05);VHL及其mRNA阳性者或HIF-1α及其mRNA阴性者MV计数明显低于VHL及其mRNA阴性或HIF-1α及其mRNA阳性者(P<0.01).结论 VHL和HIF-1α及其mRNA表达水平可能是反映胃癌发生、进展、临床生物学行为及预后的重要标记物.VHL和HIF-1α及其mRNA在胃癌组织中表达可能存在负性调节作用;VHL及其mRNA可能抑制胃癌组织中微血管生成.HIF-1α及其mRNA可能促进微血管生成.
