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p110β质粒的构建及其对MKN28细胞增殖的影响
目的 构建p110β基因高表达质粒,转染胃癌MKN28细胞,观察其对胃癌MKN28细胞增殖的影响.方法 以基因组cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,构建pCMV-Flag-p110β质粒,通过酶切鉴定及测序确定无误后,转染MKN28细胞,通过实时定量PCR(Real-timePCR)和Western blot检测p110β高表达,以及通过噻唑蓝(MTT)法检测其对MKN28细胞增殖的影响.结果 成功构建了Flag-p110β质粒,在胃癌MKN28细胞中高表达p110β能促进蛋白激酶B(AKT)的磷酸化,48 h后噻唑蓝(MTT)法检测空白组、阴性对照组和高表达p110PIK组490 nm波长处的吸光度值分别为:0.791 6±0.0425、0.828 1 ±0.015 6、1.031 2±0.1094,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建Flag-p110β质粒,高表达p110β能够促进MKN28细胞增殖.
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沉默p110β基因表达对前列腺癌细胞生物学行为的影响
目的:通过RNA干涉技术沉默p110β在前列腺癌细胞C4-2中的表达,观察p110β的表达抑制对前列腺癌增殖、侵袭、转移的影响.方法:根据p110β基因序列设计并合成的siRNA片段(p110β-siRNA)转染C4-2细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中p110β基因mRNA水平的变化；Western blot检测p110β蛋白水平的变化；MTT法检测C4-2细胞增殖情况；Transwell小室侵袭实验检测C4-2细胞侵袭能力变化；细胞划痕试验检测对C4-2细胞迁移能力的影响.结果:p110β-siRNA下调了C4-2细胞中p110βmRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和侵袭迁移能力下降.结论:p110β-siRNA能够下调p110β的表达,并有效抑制C4-2前列腺癌细胞的增殖及其迁移侵袭能力.因此,沉默p110β的表达可使前列腺细胞恶性程度降低.
