首页 > 文献资料
-
供体特异性体内免疫状态定量检测方法的研究
目的 建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探讨该方法 的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定佳测试时间点.方法 取C57及BALB/C小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57-BALB/C小鼠皮肤移植排斥模型,不同时间点(分别为输注后1、2、4、10 h、1、2、3、6 d),流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/C小鼠为对照组,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率:%specific lysis=1-donor cells/recipient cells×100%.结果 CFSE染色时需要较大浓度差才能完全把两群脾细胞完全分离开,在浓度相差20倍时流式直方图才显示为两个完全独立的峰;即CFSE低浓度用0.3 μmol/L,高浓度用6 μmol/L.C57-BALB/C皮肤移植排斥模型在皮肤移植后两周即可建立,混合细胞悬液输注后,模型组与对照组输注混合细胞后1、2、4、10 h、1、2 d特异性杀伤率差异有统计学意义(t=39.5、41.1、26.2、27.4、15.8、5.5,P均＜0.01).模型组输注后1 h和2 h杀伤率分别高达(87.4±4.5)%、(92.2±3.9)%.结论 供体特异性体内免疫状态定量检测方法 流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果 没有影响,输注细胞后2～4h为佳检测时间点,体内细胞毒性实验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法.
-
食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法的建立
目的 建立食蟹猴单个核淋巴细胞体内荧光示踪方法.探索该方法的细胞采集途径、细胞输注部位和流式检测技术参数.方法 从外周血和腋窝淋巴结分别提取分离出单个核淋巴细胞,经CFSE染色后分别将荧光细胞输注食蟹猴外周血和手掌大鱼际下;经过1、2、3h后从外周血和淋巴结再次提取其中的单个核淋巴细胞,用流式细胞仪检测此样本中荧光细胞数量比例,并优选染色浓度、时长和流式检测技术参数.结果 CFSE佳染色浓度为1 μmol/L,佳染色时长为15 min;细胞悬液输注1、2、3h后血管通道组中荧光细胞比例平均值依次为2.37％、0.48％、0.01％,而淋巴管通道中荧光细胞比例显著高于血管通道,平均值依次为12.77％、3.31％、0.07％.结论 使用淋巴管道系统进行淋巴细胞的采集示踪,与传统的从血液系统示踪方法比较,可以显著提高可监测靶细胞的数量,可以直观、量化、动态地了解淋巴细胞在体内的变化状态,此方法可重复性高,是一种稳定的食蟹猴体内免疫标记示踪方法.
