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Notch-1和微小RNA-200家族在胰腺癌上皮-间充质转化中的作用
目的 观察Notch-1和微小RNA(miRNA,miR)-200家族在吉西他滨(Gem)诱导的人胰腺癌PANC-1细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用.方法 体外培养PANC-1细胞并诱导细胞EMT,Western blot实验和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Notch-1 、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、相关转录因子及miR-200家族成员的表达;Transwell小室检测具有EMT改变的PANC-1细胞迁移和侵袭能力.结果 Gem诱导PANC-1细胞EMT适药物浓度为10 nmol/L,适时间为9 d.Western blot灰度分析显示未经Gem处理的亲代细胞(parental)组Notch-1、E-cadherin、V imentin、slug、snail、twist、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)的表达分别为0.840±0.002、0.995±0.008、1.158 ±0.001、0.253 ±0.004、0.528 ±0.003、0.346 ±0.002,0.291 ±0.006,Gem(+)组分别为1.599±0.001、0.483 ±0.001、1.821 ±0.003、0.719 ±0.004、0.919 ±0.005、0.762 ±0.002、0.701±0.004,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测parental组Notch-1、E-cadherin、Vimentin、slug、snail、twist、ZEB1 mRNA的表达分别为(2.200 ±0.010)×10-5、(1.540 ±0.002)×10-4、1.003 ±0.004、(8.580±0.003) ×10-4、(5.040±0.007) ×10-3、(6.930 ±0.001) ×10-5、(2.010 ±0.001)×10-4,Gem(+)组分别为(5.870±0.004)×10-5、(1.430±0.001)×10-5、1.660±0.007、(4.030±0.002)×10-3 、(8.980 ±0.005)×10-3 、(3.300 ±0.020)×10-4、(1.120 ±0.003)×10-3,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR法检测parental组miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429的表达水平分别为(2.340±0.002)×10-5、(4.280±0.001) ×10-6、(3.250 ±0.003) ×10-5、(2.470±0.004) ×10-5、(6.230±0.005) ×10-4,Gem(+)组分别为(0.801 ±0.000) ×10-5、(2.030±0.004)×10-6、(5.000 ±0.050)×10-6 、(3.670 ±0.003)×10-6、(1.310 ±0.002)×10-4,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).PANC-1细胞EMT改变后侵袭能力明显增强,parental组迁移和侵袭实验细胞计数分别为(25.70 ±3.67)个和(16.30±2.21)个,Gem(+)组分别为(77.40 ±3.01)个和(68.00 ±8.76)个,两组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Gem可诱导PANC-1细胞EMT,Notch-1可能是该过程的重要信号通路,并参与miR-200家族的调控.
